食品中殘留醋酸甲羥孕酮酶免疫檢測(cè)方法研究.pdf

1、本論文旨在開發(fā)快速檢測(cè)醋酸甲羥孕酮(MPA)的ELISA試劑盒。先將肟化后的MPA分別與牛血清白蛋白(bovineserumalbumin，BSA)和卵清白蛋白(ovalbumin，OVA)通過混合酸酐法交聯(lián)，制備成免疫抗原MPA-BSA和包被抗原MPA-OVA。再將得到的免疫原MPA-BSA按免疫程序免疫新西蘭白兔4只，5次免疫后發(fā)現(xiàn)其中一只兔子產(chǎn)生的抗血清效價(jià)達(dá)到6400。然后以此抗血清為基礎(chǔ)設(shè)計(jì)了間接競(jìng)爭(zhēng)ELISA方法，并優(yōu)化稀釋

2、緩沖液、pH、競(jìng)爭(zhēng)時(shí)間等實(shí)驗(yàn)條件確定最終的ELISA檢測(cè)系統(tǒng)。 本論文研制試劑盒的IC50為4.95ng/mL，線性范圍為0～100ng/mL。通過靈敏度、精密度、準(zhǔn)確度和特異性等指標(biāo)來(lái)評(píng)估此檢測(cè)方法，最低檢測(cè)限范圍在0.1～0.3ng/mL之間，除對(duì)甲地孕酮的交叉反應(yīng)率為4.2％外，對(duì)其他結(jié)構(gòu)類似物的交叉反應(yīng)率≤0.1％，并且標(biāo)準(zhǔn)和樣品的重復(fù)性的批內(nèi)變異系數(shù)小于15％，批間變異系數(shù)小于20％。本論文以1ng/g和5ng/g兩個(gè)