加替沙星、呋喃西林在食品中殘留的酶聯(lián)免疫檢測(cè)法的研究.pdf

1、隨著全球經(jīng)濟(jì)一體化和食品貿(mào)易國(guó)際化的進(jìn)行，食品安全已經(jīng)成為一個(gè)重要的公共衛(wèi)生問題。近幾年來，中國(guó)出口食品的藥物殘留問題不斷發(fā)生，食品出口也因藥物殘留問題屢屢受阻，給中國(guó)造成了巨大的經(jīng)濟(jì)損失，嚴(yán)重?fù)p害了中國(guó)食品的質(zhì)量形象。解決產(chǎn)品藥物殘留問題，提高中國(guó)產(chǎn)品衛(wèi)生安全質(zhì)量，已成當(dāng)務(wù)之急。 獸藥殘留不僅直接對(duì)人體產(chǎn)生急、慢性毒性作用，引起細(xì)菌耐藥性的增加，還通過環(huán)境和食物鏈的作用間接對(duì)人體健康造成潛在危害。為了保障消費(fèi)者的生命安全，越來

2、越多的國(guó)家已建立了一些藥物殘留的檢測(cè)方法。目前國(guó)內(nèi)外采用的殘留分析檢測(cè)方法主要有理化檢測(cè)法(包括HPLC、LC-MS、LC-MS/MS等儀器法)、微生物檢測(cè)法、免疫檢測(cè)法(包括ELISA、RIA、EIA、FIA、MAIA)等。 理化檢測(cè)法準(zhǔn)確、穩(wěn)定、可靠，可以作為標(biāo)準(zhǔn)方法，但儀器設(shè)備昂貴，樣品前處理復(fù)雜，費(fèi)時(shí)，費(fèi)力，不易普及；微生物檢測(cè)法往往會(huì)高出最高檢測(cè)量(MRLs)，靈敏度不高。因此必須建立快速、靈敏、有效的檢測(cè)方法。免疫檢

3、測(cè)法中的酶聯(lián)免疫檢測(cè)法(包括ELISA、MAIA等)克服了以上方法的缺點(diǎn)，是一種快速、靈敏、方便、易普及的檢測(cè)方法，有著廣闊的發(fā)展前景。本論文旨在建立加替沙星、呋喃西林酶聯(lián)免疫檢測(cè)法。 本論文分別利用加替沙星與SEM衍生物(CPSEM)分子中的羧基通過EDC法成功的制備了加替沙星與呋喃西林的免疫原，并通過動(dòng)物免疫獲得了相應(yīng)的高特異性抗體。 在對(duì)加替沙星的殘留檢測(cè)研究中，本文分別利用了間接ELISA法、直接ELISA法與M

4、AIA法。其中，利用間接法測(cè)得，加替沙星抗體的IC50是2.6ppb，檢測(cè)限為0.05ppb，線性范圍為0.1-50ppb；該抗體有很高的特異性，僅對(duì)環(huán)丙沙星有較小的交叉反應(yīng)(交叉反應(yīng)率為3.0％)；加替沙星在牛奶中的添加回收率在80-106％之間，批內(nèi)變異系數(shù)低于14.3％，批間變異系數(shù)低于19.6％。利用直接法測(cè)得，加替沙星抗體的IC50是0.45ppb，檢測(cè)限低于0.01ppb，線性范圍為0.1-10ppb；加替沙星在牛奶中的添加

5、回收率在90％以上，批內(nèi)變異系數(shù)低于4.6％，批間變異系數(shù)低于5.9％。利用磁分離免疫法對(duì)加替沙星的抗體進(jìn)行檢測(cè)，加替沙星抗體的IC50是0.085ppb，檢測(cè)限低于0.001ppb，線性范圍為0.01-10ppb；加替沙星在牛奶中的添加回收率在97％以上，變異系數(shù)低于22％；加替沙星在豬尿中的添加回收率在80％以上，變異系數(shù)低于16.5％。 在對(duì)呋喃西林殘留檢測(cè)研究中，抗體對(duì)于呋喃西林的IC50是10.5ppb。該抗體具有良好

6、的特異性，與其它硝基呋喃類藥物及其代謝物幾乎沒有交叉反應(yīng)(小于0.001％)。其中在對(duì)呋喃西林的殘留檢測(cè)中，呋喃西林的檢測(cè)線性范圍為2.5-100ppb；呋喃西林在水體系中的添加回收率在84.106％之間；批內(nèi)變異系數(shù)低于5.6％，批間變異系數(shù)低于7.3％。 通過本課題的研究，成功地制備了用于檢測(cè)加替沙星與呋喃西林的高特異性的多克隆抗體。利用這些抗體，本研究建立了加替沙星、呋喃西林的快速靈敏的酶聯(lián)免疫吸附檢測(cè)法，為最終開發(fā)商品化