骨髓間充質(zhì)干細胞對防治失神經(jīng)肌肉萎縮的實驗研究.pdf

1、目的:本實驗將成年大鼠的骨髓細胞采用密度梯度離心法結(jié)合貼壁篩選法分離出骨髓間充質(zhì)干細胞(Bone marrow mesenchymal stem cells，BMSCs)進行培養(yǎng)、傳代，并選取BMSCsCD44及CD45抗原表型來鑒定獲得干細胞，然后注入大鼠失神經(jīng)肌肉模型的神經(jīng)斷端，觀察骨髓間充質(zhì)干細胞對失神經(jīng)支配骨骼肌萎縮的防治作用，并為臨床治療提供新的理論依據(jù)。
　　方法:1.取SD大鼠1只，無菌條件下取股骨和脛骨的骨髓細胞,

2、將骨髓細胞用percoll分離液(比重1.077)分離骨髓間充質(zhì)干細胞的單個核細胞，然后將單細胞懸液接種于含15％小牛血清DMEM培養(yǎng)基進行培養(yǎng)、純化和擴增。描畫出MSCs生長曲線，通過免疫組化法檢測干細胞CD44、CD45表面標志物。
　　2.選取健康SD大鼠36只，切斷左側(cè)后肢坐骨神經(jīng)制備神經(jīng)缺損模型，隨機分為觀察組和對照組，觀察組肌肉注射1.5×105個/ml的骨髓間充質(zhì)干細胞懸液0.2 ml，對照組注入同等劑量低糖DMEM

3、培養(yǎng)液，分別于2、4、6周后對2組大鼠進行大體觀察、檢測肌濕重、肌纖維橫截面積、坐骨神經(jīng)指數(shù)(SFI)，免疫組織化學(xué)法檢測肌肉組織Bcl-2、Bax的表達變化。
　　結(jié)果:利用密度梯度離心結(jié)合貼壁篩選法能有效分離純化BMSCs，培養(yǎng)出的細胞均具有典型的干細胞形態(tài)特征，傳代后細胞增殖速度較快。BMSCs標志物CD44呈陽性表達，造血干細胞標志物CD45陰性表達。造模后2、4、6周，觀察組大鼠腓腸肌濕重、腓腸肌纖維橫截面積均顯著高于對

4、照組，SFI則顯著高于對照組，差異均具有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)。術(shù)后2、4、6周，觀察組肌肉組織中Bcl-2陽性細胞表達強度均高于對照組，Bax陽性細胞表達強度均低于對照組，差異均具有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。
　　結(jié)論:1.用密度梯度離心結(jié)合貼壁培養(yǎng)法能有效分離出純度較高的BMSCs，并具有良好的增殖速度，體外培養(yǎng)的后的BMSCs可進行體內(nèi)移植，并在局部損傷微環(huán)境中發(fā)揮作用。
　　2.BMSCs可提高失神經(jīng)后骨骼肌濕