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文檔簡介
1、目的：在胃癌中預(yù)測并驗證可能調(diào)控腹膜轉(zhuǎn)移相關(guān)基因PRL-3表達(dá)的microRNA(miRNA)分子。
方法：通過生物信息學(xué)技術(shù)，運用4個miRNA靶基因預(yù)測軟件，結(jié)合相關(guān)文獻(xiàn)，選取9條高度可能靶向PRL-3的miRNA分子，用qRT-PCR方法在胃癌組織和胃癌細(xì)胞系SGC7901、MKN45、MKN28、BGC823及正常胃黏膜組織和胃黏膜上皮細(xì)胞系GES-1、HFE-145中檢測這9條miRNA分子表達(dá)情況，得出兩條在胃
2、癌組織及胃癌細(xì)胞中表達(dá)下調(diào)最明顯的miRNA分子(miRNA-551a、miRNA-495)，設(shè)計并合成這2種miRNA分子化學(xué)合成類似物miRNA mimics，分別用Lipofectamine2000TM脂質(zhì)體將miRNA mimics瞬時轉(zhuǎn)染到SGC7901、MKN28細(xì)胞，設(shè)立空白對照組及陰性對照組，用qRT-PCR技術(shù)檢測轉(zhuǎn)染24小時后PRL-3mRNA的表達(dá)情況，用Western Blot方法檢測轉(zhuǎn)染后細(xì)胞中PRL-3蛋白水
3、平變化。Transwell小室實驗檢測轉(zhuǎn)染后SGC7901、MKN28細(xì)胞侵襲及轉(zhuǎn)移能力變化。
結(jié)果：胃癌細(xì)胞SGC7901和MKN28在瞬時轉(zhuǎn)染miR-495/miR-551a mimics后，均明顯抑制了PRL-3蛋白及mRNA的表達(dá)，tranwell侵襲遷移實驗表明，在轉(zhuǎn)染miR-495/miR-551a mimics后，胃癌細(xì)胞的侵襲和遷移能力均明顯下降。
結(jié)論：miRNA-551a、miRNA-49
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