血栓性心腦血管疾病血小板微顆粒及其膜功能蛋白表達(dá)關(guān)系的研究.pdf

1、目的： 建立以全血為標(biāo)本的流式細(xì)胞儀(FCM)檢測血小板微顆粒(plateletmicroparticle,PMPs)的方法，以FCM富血漿法檢測PMP為對(duì)照，比較兩種檢測方法結(jié)果的差別。探討血小板激活劑及不同標(biāo)本處理方式對(duì)PMP及其表面膜糖蛋白GPⅡb/Ⅲa(PAC-1)及P-選擇素(CD62P)表達(dá)的檢測結(jié)果的影響。在此基礎(chǔ)上觀察血栓性心腦血管疾病患者治療前后PMP數(shù)量及其表面膜蛋白PAC-1及CD62P的活化比率的變化。探

2、討PMP及其表面膜糖蛋白PAC-1及CD62P活化比率檢測在血栓性心腦血管疾病發(fā)病機(jī)制中的作用，及其在病情預(yù)測和預(yù)后評(píng)價(jià)中的意義。 方法： 1.FCM全血法檢測PMP、FCM富血漿法檢測PMP及結(jié)果比較： 納入20例健康人做為檢測對(duì)象，抽血后將靜脈血置于CTAD抗凝管中，每人采血兩管，每管2.7ml。按檢測方法分成a、b兩組，a組用全血法檢測，b組用富血漿法檢測，并對(duì)結(jié)果進(jìn)行比較。 2.不同濃度凝血酶作激

3、活劑對(duì)結(jié)果的影響： 抽取20例健康人靜脈血各2.7ml，分別以0.1U/ml、0.5U/ml、1U/ml三個(gè)濃度的凝血酶激活劑激活血小板，F(xiàn)CM全血法檢測PMP及其表面膜糖蛋白PAC-1及CD62P的表達(dá)，并對(duì)結(jié)果進(jìn)行比較。 3.兩種方式處理標(biāo)本對(duì)結(jié)果的影響： 抽取20例健康人靜脈血各2.7ml。用兩種不同方式對(duì)新鮮靜脈血進(jìn)行處理，并分別用FCM全血法檢測PMP及其表面膜糖蛋白PAC-1、CD62P的表達(dá)。

4、 4.血栓性心腦血管疾病患者治療前后PMP及其表面膜蛋白PAC-1及CD62P活化比率的檢測： 將研究對(duì)象分組:血栓性心血管疾病組(40例)、血栓性腦血管疾病組(40例)及正常對(duì)照組(20例)。抽取兩組患者及正常對(duì)照組的靜脈血各2.7ml，置于CTAD抗凝管中，制成樣本備用。用FCM全血法檢測各組患者治療前后PMP及其表面膜糖蛋白PAC-1及CD62P的表達(dá)，分析結(jié)果。 結(jié)果： 1.a組：FCM全血法檢測組，P

5、MP：64.27±8.24/104Plt、PAC-1：6.84±0.65％、CD62P：3.02±0.65％，平均完成檢測所用時(shí)間：2±0.5h。b組：FCM富血漿法檢測組，PMP：68.21±9.41/104Plt、PAC-1：8.01±0.21％、CD62P：3.98±0.87％，平均完成檢測所用時(shí)間：3.6±0.5h。通過比較，兩種方法所得的檢測結(jié)果差異顯著，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，P＜0.05。 2.在不同濃度凝血酶激活劑的作用下

6、，激活血小板，比較PMP及其血小板表面膜糖蛋白PAC-1及CD62P的表達(dá)的結(jié)果的變化。各組結(jié)果比較均有顯著性差異(P＜0.01)，隨凝血酶濃度增高呈逐漸增加趨勢。 3.全血標(biāo)本4℃低溫放置6h后制備檢測的結(jié)果與當(dāng)即制備檢測的結(jié)果無顯著差異(P＞0.05);24h后制備檢測的結(jié)果與當(dāng)即制備檢測的結(jié)果有顯著差異P＜0.05，72h后制備檢測的結(jié)果與當(dāng)即制備檢測的結(jié)果有顯著差異(P＜0.01)。PMP及其表面膜糖蛋白PAC-1及CD

7、62P的表達(dá)均明顯升高。全血標(biāo)本制備后在4℃避光環(huán)境下放置4h、24h、72h后檢測的結(jié)果與當(dāng)即制備檢測的結(jié)果無顯著性差異(P＞0.05)，而96h后檢測的結(jié)果開始有顯著差異P＜0.05。 4.正常對(duì)照組：PMP：65.47±9.77/104Plt、CD62P：3.15±0.76％、PAC-1：6.97±0.95％；血栓性心血管疾病組治療前PMP：209.23±21.92/104Plt、CD62P：54.69±7.81％、PAC

8、-1：87.41±7.10％；治療后PMP：117.90±11.87/104Plt、CD62P：25.15±6.33％、PAC-1：46.20±5.08％；治療前PMPs、CD62P、PAC-1水平均較正常對(duì)照組有顯著性升高P＜0.01；治療后較治療前有顯著性下降(P＜0.01)。 結(jié)論： 1.FCM全血法檢測PMP，標(biāo)本更接近生理狀態(tài)，具有快速、簡便、靈敏度高的優(yōu)點(diǎn)，并可避免血小板體外激活及PMP的丟失。 2.

9、激活劑凝血酶濃度增加，PMP及其表面膜糖蛋白PAC-1及CD62P的表達(dá)也隨之增加。 3.未當(dāng)即處理的標(biāo)本4℃低溫存放6h內(nèi),PMP及其表面膜糖蛋白PAC-1及CD62P的表達(dá)受實(shí)驗(yàn)條件影響較小，結(jié)果穩(wěn)定，無顯著差異，檢測有效。24h、72h后PMP及其表面膜糖蛋白PAC-1及CD62P表達(dá)的有明顯升高，結(jié)果差異顯著。全血標(biāo)本制備后當(dāng)天及過夜24-72h，PMP及其表面膜糖蛋白PAC-1及CD62P的表達(dá)受實(shí)驗(yàn)條件影響較小，結(jié)果

10、穩(wěn)定，無顯著差異，檢測有效。96h后PMP及其表面膜糖蛋白PAC-1及CD62P表達(dá)的有明顯升高，結(jié)果有顯著差異，無應(yīng)用價(jià)值。 4.PMP及其表面膜糖蛋白PAC-1及CD62P在血栓性心腦血管疾病患者體內(nèi)高度表達(dá)，明顯高于正常對(duì)照組，具有顯著性差異。在血栓性心腦血管疾病的發(fā)生過程中，血小板活化起重要的促進(jìn)作用，其特異性標(biāo)志物可作為該類疾病的臨床輔助診斷指標(biāo)。 5.臨床治療后患者癥狀緩解，體內(nèi)PMP及其表面膜糖蛋白PAC-

11、1及CD62P表達(dá)明顯下降，與未治療組間存在顯著性差異。PMP及其表面膜糖蛋白PAC-1及CD62P表達(dá)的檢測可作為血栓性心腦血管疾病療效及預(yù)后判斷的臨床輔助診斷指標(biāo)。 6.治療后PMP及其表面膜糖蛋白PAC-1及CD62P表達(dá)明顯降低，但仍高于正常對(duì)照組，說明體內(nèi)仍存在血小板活化刺激因素，為心腦血管疾病患者長期藥物治療提供了理論依據(jù)。 7.PMP的產(chǎn)生在血栓性心腦血管疾病中與表示血小板活化的血小板表面膜糖蛋白PAC-1