腸道Na+-膽汗酸轉運體與高脂血癥關系的研究.pdf

1、目的:本研究通過建立高脂血癥大鼠模型,以腸道Na+／膽汁酸轉運體(ileal bile acid transpotter,IBAT)為研究對象,探討腸道Na+／膽汁酸轉運體與膽汁酸代謝及高脂血癥形成的相關性,為防治高脂血癥提供新的依據和分子理論基礎,有望為治療膽汁酸代謝紊亂及相關性疾病提供一種新的思路。
　　 方法:取Wistar雄性大鼠(體重145±8.5g)60只,隨機分為2組,每組30只:普通飲食對照組(簡稱對照組)、高脂

2、飲食實驗組(簡稱實驗組)。對照組予以普通飲食,實驗組予以高脂飲食(配方為:在基礎飼料中加入質量分數為0.04膽固醇、0.1豬油、0.05蔗糖、0.005膽酸鈉、0.002丙基硫氧嘧啶),喂食90天,建立高脂血癥模型,定期取血用自動生化儀檢測膽固醇含量,4—6周監(jiān)測血膽固醇水平,觀察建模是否達到要求。兩組入選大鼠均需排除已飲用含其它類藥物飲食,高脂血癥、糖尿病、畸形等疾病存在。建模成功后,所用實驗方法分為以下兩個環(huán)節(jié):1.分別提取對照組和

3、實驗組的空腸末端、回腸末端、盲腸及結腸近端組織的RNA,應用逆轉錄-聚合酶鏈反應(RT-polymerase chain reaction:RT—PCR)技術檢測兩組模型腸組織的IBAT基因表達的強度；2.取對照組和實驗組的空腸末端、回腸末端、盲腸及結腸近端組織,石蠟切片后用免疫組化SP(streptavidin—perosidase)法檢測兩組模型腸組織的IBAT表達的強度。統(tǒng)計數據運用SPSS14.0 for windows統(tǒng)計軟件

4、包作統(tǒng)計學處理,P<0.05顯示有統(tǒng)計學意義。
　　 結果:1.電泳結果顯示:實驗中空腸末端、回腸末端、盲腸擴增產物都出現了內參β—actin基因的220bp擴增帶和IBAT基因的355bp擴增帶,且實驗組IBAT基因擴增帶亮度明顯強于對照組。結腸近端中未見IBAT基因擴增帶。半定量結果分析:利用Quantity One軟件計算比較每一泳道中PCR產物條帶的光密度值,計算IBAT基因與β—actin條帶的光密度的相對比值,通過比

5、較各樣本IBAT基因的相對值,最終得出IBAT基因在空腸、回腸末端、盲腸組織中mRNA表達的相對含量。半定量結果的相對光密度值需每組每一實驗對象同等處理條件下均重復測定3次,取其最終平均值作為統(tǒng)計用數據。最后結果顯示:結腸近端在實驗組和對照組均無表達,其余在對照組IBAT基因mRNA表達較低,空腸末端(0.88427±0.041664)、回腸末端(0.92013±0.049935)、盲腸(0.86777±0.0336157),實驗組IB

6、AT基因mRNA表達較高,空腸末端(1.12817±0.050841)、回腸末端(1.14613±0.061868)、盲腸(1.14320±0.048016)表達差異性顯著,空腸近端(t=-25.6988.P<0.05)、回腸末端(t=-15.446 P<0.05)、盲腸(t=-24.007 P<0.05),均有統(tǒng)計學意義。
　　 2.免疫組化SP(streptavidin—perosidase)法結果顯示:在高倍顯微鏡鏡下腸道

7、組織中出現黃色染色顆粒為陽性細胞。每張切片隨機選取5個視野,每個視野內觀察100個細胞,陽性細胞≥10％為陽性,否則為陰性,利用四格表的Fisher確切概率法檢驗。結果顯示:實驗組空腸末端、回腸末端、盲腸表達陽性率分別為66.3％、78.5％、55.3％；對照組空腸末端、回腸末端、盲腸表達陽性率為10.3％、12.5％、8.95％。它們之間的差異有顯著性,空腸末端IBAT基因(X2=9.631 P<0.05),回腸末端IBAT基因(X2

8、=9.873 P<0.05),盲腸IBAT基因(X2=9.209 P<0.05)。
　　 結論:1.實驗組大鼠的IBAT基因mRNA的表達較對照組明顯增加。2.實驗組和對照組大鼠的結腸近端中未見IBAT基因的表達。3.實驗組空腸末端,回腸末端及盲腸IBAT的表達明顯高于對照組,故在高脂血癥動物回腸中膽汁酸的主動轉運及空腸中膽汁酸的被動轉運過程增強,及盲腸參與膽汁酸轉運增強,進而膽汁酸攝取率增加,增加體內膽酸池大小和肝內膽固醇含量