抑制PKM2的siRNA協同抑制CCND1的作用機制研究.pdf

1、本文主要從以下幾個部分展開論述：
　　第一部分 抑制PKM2的siRNA協同抑制CCND1的作用機制研究
　　目的:研究siM2PK-1分子對CCND1表達的抑制作用并探討其機制。方法:通過克隆形成實驗及流式細胞術檢測siM2PK-1分子對于肝癌細胞增殖與周期的影響,利用實時定量PCR和Western blot檢測siM2PK-1分子對于CCND1的表達的影響,過表達PKM2及利用其它針對PKM2的干涉實驗確定siM2PK-

2、1對于CCND1抑制作用的特異性,生物信息學分析及報告基因檢測初步探究了siM2PK-1抑制CCND1表達的機制。結果:克隆形成實驗發(fā)現siM2PK-1分子對于SK-Hep-1細胞具有抑制增殖的作用,流式細胞術檢測發(fā)現siM2PK-1可以引起細胞周期阻滯于G0-G1期,實時定量PCR和Western blot證實siM2PK-1分子對于CCND1的表達在mRNA水平和蛋白水平都有影響,過表達PKM2分子不能引起CCND1分子在mRNA和

3、蛋白水平的上調表達,而利用其他的針對PKM2分子的siRNA也不能使CCND1的表達下調,進而得出siM2PK-1分子具有雙靶向作用,而進一步利用生物信息學分析結合報告基因確定siM2PK-1可能通過不完全互補的模式與CCND1分子啟動子區(qū)的序列結合進而引起其啟動子區(qū)的CpG島的甲基化。結論:抑制PKM2的siM2PK-1分子具有協同抑制CCND1分子表達的作用。
　　第二部分 缺氧與miRNA表達關系的研究
　　目的:探討

4、不同缺氧條件對HepG2細胞中miR-210表達水平的影響。方法:采用CoCl2、物理缺氧以及Na2SO3三種不同的缺氧條件誘導HepG2細胞,利用實時定量 PCR技術檢測不同缺氧模式誘導前后HepG2細胞miR-210等表達變化。
　　結果:三種缺氧模式均可以誘導HepG2細胞miR-210表達上調,其表達與CoCl2及Na2SO3的濃度有劑量依賴關系。結論:CoCl2、物理缺氧以及Na2SO3三種不同的缺氧條件均可以有效誘導H