龜版提取物對骨髓間充質干細胞增殖過程中核受體的影響.pdf

1、研究目的 核受體是配體依賴性轉錄因子超家族，核受體的配體作用幾乎包含了生物體發(fā)育、維持自身穩(wěn)態(tài)、細胞分裂、分化等所有基本生命過程。核受體介導的轉錄活化機制的研究是近十年生物學研究的熱點，繼G蛋白耦聯(lián)受體和離子通道之后，核受體已成為第三大類非酶性治療靶點。前期工作發(fā)現(xiàn)龜版在體內、外可以促進骨髓間充質干細胞(mesenchymalstemcells，MSCs)的增殖并誘導MSCs分化為神經元樣細胞，經過較長時間誘導后MSC還可能向成

2、骨方向分化。本研究根據中醫(yī)“腎藏精，主發(fā)育”的理論，在既往研究的基礎上，觀察龜版提取物對MSCs增殖過程中視黃酸受體(retinoicacidreceptor-α，RARα)、維生素D受體(vitaminDreceptor，VDR)、糖皮質激素受體(glucocorticoidreceptor，GR)、雌激素受體(estrogenreceptor，ER)、甲狀腺激素受體(thyroidhormonereceptor-α，TRα)和過氧化

3、物酶體增殖物活化受體(peroxisomeproliferatoractinatedreceptor-δ，PPARδ)表達的影響，從基因水平探討中藥龜版補腎填精的作用機制，進一步篩選龜版提取物和作用藥理靶點，為龜版提取物的開發(fā)與臨床應用提供實驗依據。 研究方法 使用密度梯度法分離大鼠MSCs進行培養(yǎng)，經5-溴脫氧尿嘧啶標記和CD44免疫組化染色鑒定后，將體外培養(yǎng)的MSCs分為空白對照組、龜版低劑量組、龜版中劑量組、龜版高

4、劑量組，加入不同濃度的龜版提取物，分別于龜版提取物作用12h、24h、72h、120h后，用免疫組化法和免疫熒光細胞化學法檢測MSCs的RARα、VDR、GR、ER、TRα、PPARδ的表達。 研究成果 1.龜版提取物作用的各組MSCs的RARα、VDR表達陽性細胞均顯著高于對照組，且呈劑量依賴性；作用24h后RARα表達達峰值，作用72h后VDR表達達峰值。 2.龜版提取物作用的各組MSCs增殖過程中，用免疫組