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文檔簡介
1、目的:
檢測非小細胞肺癌組織中表皮生長因子受體(Epidermal GrowthFactor Receptor,EGFR)突變和EGFR下游關鍵蛋白絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶(蛋白激酶B)(protein kinase B,PKB,AKT)及磷酸化細胞外信號調節(jié)激酶(phospho-extracellular signal-regulated kinase,ERK)磷酸化表達,研究上述變化與性別、年齡、吸煙及預后等臨床因素之間
2、的關系。為非小細胞肺癌個體化靶向治療的研究提供新的依據。
方法:
(1)收集湘雅醫(yī)院2003年9月至2010年7月間手術切除并經病理確診的原發(fā)性非小細胞肺癌(Non-Small Cell Lung Carcinoma,NSCLC)病例103例,冰凍和福爾馬林分別保存活檢組織。所有入選患者術前均未接受過化療或放療等任何抗腫瘤治療。
(2)收集所有患者的臨床病理資料,并對患者進行電話或通信隨訪,獲得
3、隨訪資料。
(3)將標本解凍后對所有的腫瘤組織用PCR-直接測序法(PCRand direct sequencing method)檢測肺癌組織中EGFR基因第19和21外顯子突變:免疫組織化學技術(immunohistochemistry,IHC)鏈霉菌抗生物素蛋白-過氧化物酶連結法(streptavidin-peroxidase,S-P)檢測肺癌組織中的p-AKT、p-ERK蛋白表達。
(4)對病例資料、
4、實驗結果、生存分析應用SPSS17.0軟件進行統(tǒng)計學分析,P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。
結果:
(1)EGFR基因突變情況:PCR擴增產物測序結果顯示突變的腫瘤組織DNA中可同時檢測出突變序列和野生型序列。103例NSCLC患者腫瘤組織中共有34例存在EGFR基因突變。其中,19號外顯子突變有4種突變類型均為缺失突變,突變數為24例。第21號外顯子突變均為第2573位點突變(L858R),突變數為10例。
5、在性別、年齡、原發(fā)病灶、區(qū)域淋巴結分期、遠處轉移和國際分期中不同的病例組中EGFR基因突變的表達差異均無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。在不同的吸煙史及病理學類型的病例的表達差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。
(2)EGFR下游信號傳導蛋白AKT磷酸化的表達結果:p-AKT表達總陽性率為56.3%,EGFR突變患者中p-AKT陽性率(44.8%)顯著高于無突變者的陽性率(17.8%),差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05);在性別、
6、年齡、原發(fā)病灶、區(qū)域淋巴結分期、遠處轉移和國際分期病例中不同的病例中p-AKT的表達差異均無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。在不同的吸煙史及病理學類型的病例的表達差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。
(3)EGFR下游信號傳導蛋白ERK磷酸化的表達結果:p-ERK的表達陽性率為30.1%,在不同的性別、吸煙史、原發(fā)病灶和國際分期病例中p-ERK的表達差異均無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。在年齡、區(qū)域淋巴結分期、遠處轉移及病理學類型
7、不同的病例中的表達差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。
(4)EGFR基因突變和AKT、ERK磷酸化的表達不同的患者總生存(Overall survival,OS)差異均無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。
結論:
1.非小細胞肺癌組織中存在EGFR基因突變,并且信號傳導通路下游關鍵分子AKT及ERK磷酸化呈高表達。
2.吸煙可能使EGFR的19和21位點的基因突變率降低和EGFR的下游關
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