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文檔簡(jiǎn)介
1、Twist1基因是1987年Thisse B等首先在果蠅中發(fā)現(xiàn)的一個(gè)新基因。在脊椎動(dòng)物中,Twist有兩種,Twist-1 and Twist-2,他們編碼的蛋白有共同的bHLH域但是在NH2末端不同。Twit1又經(jīng)常稱(chēng)做Twist。Twist1蛋白是屬于堿性的螺旋-環(huán)-螺旋蛋白家族中的高度保守的轉(zhuǎn)錄因子,在胚胎的發(fā)生發(fā)展中發(fā)揮重要作用。此外Twist1被認(rèn)為是癌基因,影響腫瘤細(xì)胞凋亡、耐藥等,而且作為上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)換(iepithelia
2、l.Mesenchymal transition,EMT)過(guò)程中的關(guān)鍵調(diào)控因子,Twist1對(duì)腫瘤的侵襲和轉(zhuǎn)移有重要影響。到目前為止,其促腫瘤作用報(bào)道多局限于實(shí)體瘤,與造血系統(tǒng)惡性腫瘤的關(guān)系尚不明確。
我室前期工作發(fā)現(xiàn),Twist1在慢性粒細(xì)胞白血病和急性髓系白血病患者高表達(dá),促進(jìn)白血病細(xì)胞集落形成、耐藥、遷移和體內(nèi)增殖,提示Twist1可能與白血病發(fā)生發(fā)展有密切關(guān)系。為了進(jìn)一步研究Twist1基因在白血病發(fā)生和發(fā)展中的作
3、用及其對(duì)正常造血的影響,我們構(gòu)建了過(guò)表達(dá)小鼠Twist1基因(mTwist)的逆轉(zhuǎn)錄病毒載體MSCV-mTwist—IRES-GFP,將mTwist表達(dá)于小鼠Lin-骨髓單個(gè)核細(xì)胞,通過(guò)集落培養(yǎng)、Serial replating、Transwell試驗(yàn)和小鼠尾靜脈骨髓移植研究Twist1在造血系統(tǒng)中的功能。
結(jié)果發(fā)現(xiàn),過(guò)表達(dá)mTwist小鼠Lin-骨髓細(xì)胞集落能夠傳代到第5代,而空載體對(duì)照組只能傳代到3-4代;在第1-2代
4、集落傳代時(shí)過(guò)表達(dá)mTwist小鼠Lin-骨髓細(xì)胞集落形成能力顯著低于空載體對(duì)照組(P<0.05),而第3-5代集落傳代時(shí)mTwist小鼠Lin-骨髓細(xì)胞集落形成能力顯著高于空載體對(duì)照組(P<0.05)。過(guò)表達(dá)mTwist的小鼠Lin-骨髓細(xì)胞遷移能力顯著高于MSCV-V對(duì)照(P<0.05)。過(guò)表達(dá)mTwist細(xì)胞與空載體對(duì)照組均未檢測(cè)到明顯凋亡(P>0.05)。移植過(guò)表達(dá)mTwist小鼠Lin-骨髓細(xì)胞的小鼠未出現(xiàn)典型的白血病表型。
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