EDAG-1基因在白血病細胞株中的表達及意義.pdf

1、安徽醫(yī)科大學碩士學位論文EDAG-1基因在白血病細胞株中的表達及意義姓名：周穎申請學位級別：碩士專業(yè)：病理學與病理生理學指導教師：汪思應;陳振東20040401安徽醫(yī)科大學碩士學位論文E D A G - I 基因在白血病細胞株中的表達及意義碩士研究生：周穎導 師：汪思應陳振東楊曉明中文摘要目的： E D A G - I 基因是我們從人4 月齡胎肝組織與成年肝組織的差異表達基因E S T①x p r e s s e dS 娜n c e T

2、 a g ，表達序列標簽) 庫中分離得到的一種新基因。本研究通過對E D A G - I 在自血病細胞株中的表達、有無轉(zhuǎn)錄活性、是否發(fā)生突變等的檢測，探討E D A G _ I 基因與白血病的發(fā)病關系。方法：選用白血病細胞株共1 5 種，通過R T - P C R檢測細胞株中E D A G - 1 基因的表達，并回收擴增得到的E D A G - I 編碼區(qū)片段，構(gòu)建相應的重組質(zhì)粒并測序分析編碼區(qū)突變情況；利用S o u t h e r

3、nb l o t 檢測白血病細胞株中E D A G - I 基因組的重排和擴增情況；同時通過N o r t h e r nb l o t 和W e s t e r nb l o t 分別確證E D A G - Im R N A 和蛋自在白血病細胞株中的表達情況和基因的重排和擴增；利用M a m m a l J a n 姒T c H I l A l ( E RT w o - H y b r i d A s s a yK i t 和c A

4、T E n z y Ⅱl eA s s a yS y s t e m分析E D A G 一1 基因的轉(zhuǎn)錄活性：通過M e r c u r y T M P a m w a y P m m m 喀L u c i f e r a s c S y s t e m檢測E D A G 一1 在N F K B 信號轉(zhuǎn)導途徑中的作用：通過陰S A 分析高表達E D A G - I 白血病細胞系N F - c BD N A 結(jié)合活性的改變。結(jié)果：發(fā)現(xiàn)紅系

5、( K - 5 6 2 、H E L ) ，巨核系( D A M I 、M E G 一0 1 ) 、T 細胞白血病細胞中的J u r k a t 細胞在m R N A 、蛋白水平均高表達E D A G —l 基因，淋巴瘤細胞株R a j i 在m R N A 、蛋白水平略高表達E D ^ j G - 1 基因。R T —P c R 擴增的即A G 一1 基因編碼區(qū)片斷連接到p M I ) - 1 8 T 載體中，并轉(zhuǎn)入J M l 0 9