孟加拉紅介導(dǎo)的光動(dòng)力療法對(duì)牙齦卟啉單胞菌抑制作用的研究.pdf

1、目的:
　　光動(dòng)力療法(PDT)是光敏劑和特定波長激光之間的非熱能光化學(xué)反應(yīng),在反應(yīng)的過程中會(huì)產(chǎn)生單線態(tài)氧及氧自由基,從而對(duì)細(xì)胞產(chǎn)生不可逆的毒性作用。本研究通過在體外環(huán)境下利用菌懸液及構(gòu)建細(xì)菌生物膜模型,初步檢測(cè)及觀察RB介導(dǎo)的PDT(RB-PDT)對(duì)牙齦卟啉單胞菌(P.g)的抑制作用,從而為RB-PDT預(yù)防和治療牙周炎的臨床應(yīng)用提供理論及實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　方法:
　　(1)應(yīng)用不同濃度的RB在波長為490nm的 LED

2、光源激發(fā)作用下,觀察其對(duì) P.g菌懸液的抑制效果。實(shí)驗(yàn)分成兩組:對(duì)照組(0.9％生理鹽水)和 PDT組(RB濃度分別為50μM,20μM,10μM,5μM,1μM,共培養(yǎng)5分鐘,LED燈光照3分鐘)。處理完成后采用十倍稀釋法稀釋菌懸液后繼續(xù)培養(yǎng)48小時(shí)。菌落計(jì)數(shù)法得出原菌液的菌落形成單位,并進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。
　　(2)利用96孔板建立 P.g的48小時(shí)成熟生物膜模型,采用 MTT法檢測(cè)RB-PDT組(50μM),單純光照組,單純 R

3、B組及生理鹽水組作用后 P.g生物膜的吸光度值,比較各組之間的差異;
　　(3)使用激光共聚焦專用培養(yǎng)皿建立 P.g的48小時(shí)成熟生物膜模型,采用SYT09/PI熒光染色劑使細(xì)菌著色,利用激光共聚焦顯微鏡(CLSM)觀察各藥物處理組(RB-PDT組(50μM),單純光照組,單純 RB組及生理鹽水組)生物膜中細(xì)菌染色情況及死菌活菌比例。
　　結(jié)果:
　　(1)菌落平板計(jì)數(shù)法顯示RB-PDT組(RB濃度分別為50μM,20

4、μM,10μM,5μM,1μM)與生理鹽水對(duì)照組相比,P.g菌落數(shù)(CFU/ml)有顯著減少(P<0.05),且五個(gè)不同濃度的 RB-PDT組之間相互比較發(fā)現(xiàn) P.g的菌落數(shù)隨著 RB濃度的增加而減少;
　　(2)MTT檢測(cè)結(jié)果顯示 RB-PDT組(50μM)與單純光照組,單純 RB組及生理鹽水組比較差異均有顯著性(P<0.05),而單純光照組,單純 RB組及生理鹽水組之間差異無顯著性(P>0.05);
　　(3)CLSM圖

5、像顯示RB-PDT組可見P.g菌體染色以紅色(死菌)熒光為主,僅少量菌體染色為綠色(活菌)熒光,同一視圖疊加后以紅色熒光為主,而單純光照組,單純 RB組及生理鹽水組鏡下菌體菌體染色以綠色(活菌)熒光為主,僅少量菌體染色為紅色(死菌)熒光,同一視圖疊加后以綠色熒光為主。
　　結(jié)論:
　　(1)RB-PDT對(duì)P.g菌懸液具有明顯的抑制和破壞作用,且RB-PDT的抑制作用有濃度相關(guān)性;
　　(2)P.g的菌斑生物膜構(gòu)建成功,