在心房成纖維細(xì)胞中AngⅡ經(jīng)PDGF-Rac1-NFκB途徑促進(jìn)心房纖維化形成的機(jī)制.pdf

1、背景：
　　心房顫動(dòng)（房顫）是臨床上常見(jiàn)的心律失常之一，其發(fā)病率隨年齡增長(zhǎng)而增加。房顫與多種基礎(chǔ)心臟疾病相關(guān)如，冠狀動(dòng)脈粥樣硬化心臟病（冠心?。?、高血壓、心臟瓣膜病、心力衰竭（心衰）以及心臟手術(shù)等，且尚有相當(dāng)一部分房顫患者無(wú)可檢測(cè)到的心臟基礎(chǔ)疾病。房顫引發(fā)血流動(dòng)力學(xué)障礙和血栓栓塞事件，致使其發(fā)病率高、死亡率高、經(jīng)濟(jì)花費(fèi)巨大。目前，房顫的發(fā)病機(jī)制尚未完全明確，其臨床治療效果也不滿意。
　　房顫的藥物治療方法主要是針對(duì)誘發(fā)房顫的

2、基質(zhì)，心房纖維化是一個(gè)重要的房顫基質(zhì)，其與反復(fù)房顫事件后心房結(jié)構(gòu)進(jìn)行性退化有關(guān)。心房纖維化的具體分子機(jī)制目前仍不清楚，目前研究發(fā)現(xiàn)，轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β（TGF-β）、絲裂原活化蛋白激酶（MAPKs）、Janus激酶(JAK)/信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)子和轉(zhuǎn)錄激活子(STAT）通路、結(jié)締組織生長(zhǎng)因子（CTGF）、氧化的（Ca2+）/鈣調(diào)蛋白依賴蛋白激酶Ⅱ（CaMKⅡ）等參與心房纖維化的形成。腎素血管緊張素系統(tǒng)與多種心血管疾病的發(fā)病機(jī)制相關(guān)，心臟局部RAS系統(tǒng)

3、的激活作為一個(gè)始動(dòng)因子在心房纖維化中發(fā)揮重要作用。RAS激活后，通過(guò)其主要活性成分AngⅡ刺激大量信號(hào)途徑激活，引起心房纖維化，目前已證實(shí)的致心臟結(jié)構(gòu)重構(gòu)的確切信號(hào)通路有，AngⅡ/Rac1/STAT3、AngⅡ/Rac1/CTGF/Cx43（N-Cadherin）、Ang/Cn/NFAT/MMPs、AngⅡ/MAPKs/TGF-beta1/TRAF6、肥大細(xì)胞/PDGF-A軸等。
　　本課題前期研究已發(fā)現(xiàn)，房顫病人和胸主動(dòng)脈部分

4、結(jié)扎的大鼠模型的心房組織中，心房纖維化加重，AngⅡ的濃度升高，并且伴隨著PDGF、Rac1、NF-κB表達(dá)增加。而后在分別運(yùn)用厄貝沙坦和/或辛伐他汀干預(yù)后發(fā)現(xiàn)，心房纖維化程度的降低，AngII濃度降低，并伴隨PDGF、活性Rac1及NF-κB的表達(dá)量減少。提示AngII、PDGF、Rac1及NF-κB均參與心房纖維化機(jī)制的形成，厄貝沙坦和辛伐他汀可有效抑制心房纖維化的形成。
　　目的：
　　從體外培養(yǎng)細(xì)胞水平上，進(jìn)一步探討

5、AngII、PDGF、Rac1以及NF-κB是否有相互作用，以及其之間的上下游關(guān)系。
　　方法：
　　分離培養(yǎng)原代SD鼠心房成纖維細(xì)胞，用慢病毒載體轉(zhuǎn)染wild-typePDGF（WT-PDGF）,constitutivelyactivePDGF(PDGF-C)，dominant－negativePDGF(PDGF-D)，ConstitutivelyactiveRac1(RacV12)和dominant－negativeRa

6、c1(RacN17)，并用AngⅡ、辛伐他汀、厄貝沙坦、Rac1特異性阻滯劑NSC23766干預(yù)心房成纖維細(xì)胞，用免疫印跡測(cè)定NF-κB的蛋白表達(dá)量，PAK-PBDPulldown測(cè)定活性Rac1的表達(dá)，ELISA測(cè)定細(xì)胞內(nèi)的PDGF蛋白的含量，實(shí)時(shí)定量PCR測(cè)定纖維化標(biāo)記物COL1A1mRNA水平表達(dá)，以及PDGF與Rac1的轉(zhuǎn)染率。
　　結(jié)果：
　　1.在心房成纖維細(xì)胞中，AngⅡ（10-6mol/L）不同時(shí)間刺激心房成

7、纖維細(xì)胞后，細(xì)胞內(nèi)PDGF的濃度在AngⅡ干預(yù)5min時(shí)增加（p＜0.05），活性Rac1的表達(dá)在30min時(shí)顯著升高（p＜0.01）、NF-κB蛋白表達(dá)量在2h時(shí)明顯增加（p＜0.01）。AngⅡ以不同濃度干預(yù)心房成纖維細(xì)胞后24h后,細(xì)胞內(nèi)PDGF的濃度在AngⅡ濃度為10-8mol/L時(shí)顯著升高（p＜0.01），活性Rac1的表達(dá)以及NF-κB蛋白表達(dá)量在AngⅡ濃度為10-7mol/L時(shí)均增加（p＜0.05）。
　　2.在

8、心房成纖維細(xì)胞內(nèi)，高表達(dá)PDGF后，活性Rac1與NF-κB蛋白表達(dá)量均升高（均p＜0.01）。沉默PDGF后，活性Rac1與NF-κB蛋白表達(dá)量均降低（均p＜0.01）。
　　3.在心房成纖維細(xì)胞內(nèi)，高表達(dá)Rac1后，NF-κB蛋白表達(dá)量升高（p＜0.01），沉默Rac1后，NF-κB蛋白表達(dá)量降低（p＜0.01）。
　　4.分別用辛伐他汀和厄貝沙坦干預(yù)心房成纖維細(xì)胞后，Rac1蛋白的活性與NF-κB蛋白的表達(dá)均降低（均p

9、＜0.01），且二者聯(lián)合干預(yù)時(shí)，降低的程度更大。
　　5.Rac1特異性抑制劑NSC23766干預(yù)心房成纖維細(xì)胞后，NF-κB蛋白的表達(dá)量降低（p＜0.01）。
　　結(jié)論：
　　本研究，從體外培養(yǎng)細(xì)胞水平，揭示AngⅡ通過(guò)PDGF/Rac1/NF-κB信號(hào)通路促進(jìn)心房纖維化的形成，RAS抑制劑和他汀類藥物可阻斷這一信號(hào)通路，逆轉(zhuǎn)AngⅡ介導(dǎo)的心房纖維化。同時(shí)提示PDGF可能是促進(jìn)心房纖維化的重要因子，并且是防治房顫的新