整體柱-電泳技術(shù)在蛋白核苷活性及含量分析的應(yīng)用.pdf

1、毛細(xì)管電泳是一種強(qiáng)大的分析技術(shù)，從分析小分子到生物大分子都具有很高的效率。它具有高分離效率，高分辨率，快速，易自動(dòng)化等優(yōu)點(diǎn)，毛細(xì)管電泳在化學(xué)，生物技術(shù)，環(huán)境等方面得到了極大的應(yīng)用。
　　 毛細(xì)管電泳不僅是一種有效的分離工具而且在酶的研究和藥物開(kāi)發(fā)方面也是一個(gè)有效的平臺(tái)。在眾多的毛細(xì)管電泳技術(shù)中，電泳媒介微分析技術(shù)(EMMA)在酶抑制劑篩選，酶動(dòng)力學(xué)研究等方面是一個(gè)十分有效的工具。這種篩選通過(guò)使用二極管陣列檢測(cè)器接合多通道毛細(xì)管電

2、泳能實(shí)現(xiàn)高通量。毛細(xì)管中固定酶制作微反應(yīng)器和微流控芯片在酶研究、蛋白組學(xué)、診斷學(xué)等方面也是一個(gè)的十分有希望的微型化的方法。
　　 高血壓是最常見(jiàn)的心血管疾病之一，嚴(yán)重威脅著人類(lèi)的健康。血管緊張素轉(zhuǎn)換酶(ACE)能將血管緊張素Ⅰ轉(zhuǎn)換為有高活性的血管緊張素Ⅱ，引起血壓升高。在抗高血壓藥物中，血管緊張素轉(zhuǎn)換酶抑制劑(ACEI)是一類(lèi)常見(jiàn)的有效的藥物，如卡托普利，賴諾普利。但合成ACEI類(lèi)降壓藥物的使用常伴隨著多種不良反應(yīng)。近年來(lái)，大量

3、研究發(fā)現(xiàn)ACEI廣泛存在于天然產(chǎn)物中，天然產(chǎn)物中的ACEI與合成ACEI相比有安全性高、降壓持久、無(wú)副作用等優(yōu)點(diǎn)。從中草藥和食品中間篩選沒(méi)有副作用的新抗高血壓藥引起了廣大學(xué)者的興趣。為此本學(xué)位論文主要做了以下工作：
　　 1、利用毛細(xì)管電泳技術(shù)，結(jié)合酶微反應(yīng)器從中草藥和食品中間篩選沒(méi)有副作用的篩選ACEI。將ACE直接固定在整體基質(zhì)上，制成了酶微反應(yīng)器，結(jié)合毛細(xì)管電泳在線分離，篩選ACEI.制備了將酶直接共價(jià)固定于整體基質(zhì)的AC

4、E微反應(yīng)器，考查卡托普利，賴諾普利，和各種中草藥提取物的抑制作用，從中草藥中篩選出沒(méi)有副作用的新抗高血壓藥。通過(guò)篩選發(fā)現(xiàn)山楂，決明子，槐米等水提物有一定的抑制效果，分別得出了其抑制率。
　　 2、毛細(xì)管電泳分析肽和蛋白質(zhì)時(shí)，由于肽和蛋白質(zhì)的表面的不均一性，肽和蛋白質(zhì)特別是堿性蛋白/肽易于被毛細(xì)管壁吸附，使結(jié)果到了一個(gè)不能接受的水平。針對(duì)這種情況，本文建立了高效毛細(xì)管電泳快速分離IgG等蛋白質(zhì)及肽的方法。用化學(xué)共價(jià)改性毛細(xì)管成功抑

5、制了堿性蛋白及肽在空白毛細(xì)管上的吸附，實(shí)現(xiàn)了毛細(xì)管電泳對(duì)蛋白樣品的高效的分離、得到了較高的蛋白回收率、良好的重現(xiàn)性。較非共價(jià)包覆毛細(xì)管有穩(wěn)定性高，更寬的pH范圍等優(yōu)點(diǎn)。
　　 3、建立簡(jiǎn)單、快速測(cè)定冬蟲(chóng)夏草和人工蛹蟲(chóng)草子實(shí)體中蟲(chóng)草素、腺嘌呤、鳥(niǎo)嘌呤、尿嘧啶、次黃嘌呤、腺苷、鳥(niǎo)苷、尿苷、次黃苷9種核苷及堿基成分的高效毛細(xì)管區(qū)帶電泳法，比較天然冬蟲(chóng)夏草與人工蛹蟲(chóng)草子實(shí)體中核苷類(lèi)化合物的含量。采用未涂層彈性石英毛細(xì)管，以硼砂-硼酸溶液