三七有效成分對(duì)人子宮內(nèi)膜細(xì)胞炎癥反應(yīng)的作用.pdf

1、本課題建立了由細(xì)菌脂多糖誘導(dǎo)的人子宮內(nèi)膜細(xì)胞的炎癥模型，并通過(guò)細(xì)胞毒實(shí)驗(yàn)(MTT法)觀察了三七有效成分及對(duì)照藥宮血寧膠囊作用于人子宮內(nèi)膜細(xì)胞的細(xì)胞毒作用，確定了三七有效成分及對(duì)照藥宮血寧膠囊干預(yù)子宮內(nèi)膜細(xì)胞的最佳濃度(三七皂苷12.5m咖1+三七氨酸3.13mg/ml；宮血寧5mg／ml)，并從NF-KB、TNF-α、IL-1三個(gè)方面觀察三七有效成分對(duì)人子宮內(nèi)膜細(xì)胞炎癥反應(yīng)的作用。結(jié)果顯示： l、人子宮內(nèi)膜細(xì)胞的炎癥模型的建立

2、 目的：建立通過(guò)細(xì)菌脂多糖誘導(dǎo)人子宮內(nèi)膜細(xì)胞產(chǎn)生炎癥模型的方法。 方法：采用5個(gè)梯度濃度的大腸桿菌型細(xì)菌脂多糖(LPS)作用子宮內(nèi)膜細(xì)胞，通過(guò)MTT法確定對(duì)子宮內(nèi)膜細(xì)胞生長(zhǎng)的抑制率(IR)≤10％濃度作為造模濃度。以此濃度干預(yù)子宮內(nèi)膜細(xì)胞，觀察正常對(duì)照組，48h模型組，72h模型組的子宮內(nèi)膜細(xì)胞的白細(xì)胞介素1β(IL-lβ)和腫瘤壞死因子-α(TNF-α)的分泌變化情況。 結(jié)果：符合IR≤lO％的細(xì)菌脂多糖濃度為1

3、00ng/ml。以此濃度干預(yù)48h及72h模型組的子宮內(nèi)膜細(xì)胞的IL-1β和TNF-α的濃度明顯高于同時(shí)段正常對(duì)照組，說(shuō)明造模成功。 結(jié)論：100ng/ml可為L(zhǎng)PS誘導(dǎo)人子宮內(nèi)膜細(xì)胞產(chǎn)生炎癥模型的最佳濃度。 2、三七有效成分、對(duì)照藥宮血寧膠囊的劑量確定篩選實(shí)驗(yàn) 目的：篩選三七有效成分、對(duì)照藥宮血寧膠囊作用于人子宮內(nèi)膜細(xì)胞的最佳濃度。 方法：通過(guò)MTT法確定對(duì)子宮內(nèi)膜細(xì)胞的抑制率(IR)≤10％的濃度作為

4、后續(xù)實(shí)驗(yàn)的干預(yù)濃度。 結(jié)果：符合IR≤10％的三七有效成分的濃度為三七皂苷12.5mg/ml+三七氨酸3.13mg/ml；對(duì)照藥宮血寧膠囊的濃度為5mg/ml。 結(jié)論：三七皂苷12.5mg/ml+三七氨酸3.13mg/ml；宮血寧5mg/ml可作為后續(xù)實(shí)驗(yàn)中三七有效成分、對(duì)照藥宮血寧膠囊干預(yù)子宮內(nèi)膜細(xì)胞的最佳濃度。 3、三七有效成分對(duì)子宮內(nèi)膜細(xì)胞炎癥NF-KB活性及TNF-α、IL-ImRNA表達(dá)的干預(yù)作用

5、 目的：探討NF-KB及TNF-α、IL-1在炎性子宮出血中的作用及三七有效成分的干預(yù)作用。 方法：電泳遷移率改變分析法(EMSA)檢測(cè)子宮內(nèi)膜細(xì)胞NF-KB與靶基因DNA的結(jié)合活性；用RT-PCR法檢查子宮內(nèi)膜細(xì)胞TNF-α、IL-1mRNA的表達(dá)。 結(jié)果：與模型組及宮血寧對(duì)照組相比，三七有效成分可明顯降低NF-KB活性及TNF-α、IL-1mRNA表達(dá)，具有顯著的統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；與正常組相比無(wú)顯著性差別。 結(jié)論