燃煤污染型氟中毒大鼠學(xué)習(xí)記憶能力改變及其與腦組織MAPK-ERK信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路的關(guān)系.pdf

1、目的:研究燃煤污染型氟中毒大鼠學(xué)習(xí)記憶能力和絲裂原活化蛋白激酶(Mitogen-activated protein kinase，MAPK)/細(xì)胞外調(diào)節(jié)蛋白激酶1/2(Extracellular signal-regulated kinases1 and2，ERK1/2)信號(hào)通路的變化，分析MAPK/ERK信號(hào)通路改變與氟中毒大鼠神經(jīng)病理學(xué)、行為學(xué)改變等方面的關(guān)系，探討燃煤污染型氟中毒中樞神經(jīng)系統(tǒng)損害的發(fā)病機(jī)制。
　　方法:SD大

2、鼠隨機(jī)分為3組（每組8只，雌雄各半），即對(duì)照組、低劑量染氟組和高劑量染氟組;染氟組以貴州省地方性燃煤污染型氟中毒重病區(qū)燃煤烘烤的玉米為主要飼料，復(fù)制不同攝氟劑量的慢性氟中毒大鼠模型，實(shí)驗(yàn)期為6個(gè)月。實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)用Morris水迷宮方法檢測(cè)大鼠行為學(xué)變化;用HE染色觀察實(shí)驗(yàn)大鼠腦組織形態(tài)改變、免疫組化檢測(cè)ERK1/2在大腦中的分布及定位情況;Western-blotting及Real-time PCR檢測(cè)Ras、B-raf、MEK和ERK1

3、/2等MAPK/ERK信號(hào)通路相關(guān)蛋白的表達(dá)水平。
　　結(jié)果:成功建造燃煤污染型氟中毒大鼠模型，表現(xiàn)為染氟組有不同程度的氟斑牙發(fā)生，以高劑量染氟組尤為嚴(yán)重，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，正常對(duì)照組無氟斑牙形成;與對(duì)照組相比，染氟組尿氟含量均增加，且以高劑量染氟組明顯，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05);各實(shí)驗(yàn)組間股骨氟含量有顯著性差異，其中高氟組大鼠骨氟含量為4623.76±204.92 mg/kg，低氟組為2111.79±13

4、9.54 mg/kg，而正常對(duì)照組為1478.58±126.57 mg/kg;造模6個(gè)月后染氟組大鼠腦氟含量明顯比對(duì)照組高，且高氟組大鼠腦氟含量高于低氟組(P＜0.05)。行為學(xué)試驗(yàn)表明，與對(duì)照組相比，染氟組動(dòng)物逃避潛伏時(shí)間均明顯延長，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05);并且高劑量染氟組大鼠逃避潛伏時(shí)間長于低劑量染氟組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）;染氟組大鼠第7天穿越目標(biāo)區(qū)次數(shù)明顯低于對(duì)照組，以高劑量染氟組尤為明顯，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義

5、(P＜0.05)。HE染色未發(fā)現(xiàn)各組大鼠腦組織有明顯形態(tài)改變。免疫組化結(jié)果顯示:ERK1/2陽性表達(dá)主要分布在各組實(shí)驗(yàn)大鼠大腦海馬CA3區(qū)及齒狀回分子層;總ERK1/2未見各組大鼠腦組織出現(xiàn)明顯區(qū)別，但染氟組大鼠腦組織p-ERK1/2陽性表達(dá)強(qiáng)度明顯高于對(duì)照組，尤以高劑量染氟組明顯（P＜0.05）。Western blotting檢測(cè)結(jié)果顯示:總Ras、B-Raf、MEK、ERK1/2在對(duì)照組、低劑量染氟組及高劑量染氟組間表達(dá)無差異;而

6、Ras、p-B-Raf、p-MEK、p-ERK1/2在染氟組中的表達(dá)均高于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05），且高劑量染氟組高于低劑量染氟組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。Real-time PCR結(jié)果顯示:與對(duì)照組比較，染氟組Ras、B-Raf、MEK1/2、ERK1/2 mRNA表達(dá)明顯增高，且高劑量染氟組高于低劑量染氟組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。
　　結(jié)論:燃煤污染型氟中毒可引起大鼠學(xué)習(xí)記憶能力減退，其機(jī)