多沙唑嗪光學異構(gòu)體抑制大鼠血管平滑肌細胞增殖的實驗研究.pdf

1、目的：血管平滑肌細胞（VSMCs）增殖是高血壓、動脈粥樣硬化及經(jīng)皮冠狀動脈成形術(shù)（PTCA）后再狹窄等多種疾病的共同病理基礎，抑制VSMCs增殖可能是防止動脈粥樣硬化斑塊形成，預防PTCA術(shù)后再狹窄的有效途徑之一。多沙唑嗪是一種新型長效且選擇性強的α1腎上腺素能受體阻斷劑，能使周圍血管擴張，具有降壓，改善微循環(huán)，改善血脂代謝等作用，并已成為國內(nèi)外治療良性前列腺增生（benign prostatic hyperplasia，BPH）并發(fā)下

2、尿路癥狀（lower urinary tract symptoms.LUTS）的一線藥物，其不良反應少，安全性高。多沙唑嗪經(jīng)手性分離成左旋多沙唑嗪（一）Doxazosin和右旋多沙唑嗪（+）doxazosin。經(jīng)過多年研究結(jié)果表明，（-）Doxazosin可能成為優(yōu)于（+）doxazosin、（±）doxazosin治療BPH/LUTS藥物，但對于VSMCs的作用尚不清楚。因此，探討（+）Doxazosin及其光學異構(gòu)體對大鼠VSMCs

3、增殖的抑制作用十分必要。
　　 方法：選用120～150g健康SD大鼠，采用組織貼塊培養(yǎng)法培養(yǎng)大鼠主動脈血管平滑肌細胞，胰酶消化法傳代，并應用相差顯微鏡和鼠抗人α-平滑肌肌動蛋白單克隆抗體（Mouse monoclonal anti-smooth muscleα-actin antibody）對細胞進行形態(tài)學和免疫組化鑒定，根據(jù)細胞生長情況繪制細胞生長曲線，光學顯微鏡下觀察經(jīng)（-）Doxazosin、（+）doxazosin和（

4、±）doxazosin處理后VSMCs的形態(tài)學改變；采用MTT比色法檢測細胞增殖活性，觀察（-）Doxazosin、（+）doxazosin和（±）doxazosin的抗大鼠主動脈VSMCs的增殖作用以及與α1受體的相關(guān)性。
　　 結(jié)果：
　　 1、VSMC形態(tài)學觀察及免疫細胞化學鑒定：倒置相差顯微鏡下單個平滑肌細胞呈梭形或帶狀，有多個細胞突起，胞漿豐富，核卵圓形居中，有一個或多個核仁。細胞生長致密時表現(xiàn)為典型的“谷一峰

5、”狀生長。α-actin免疫細胞化學反應顯示，VSMC被染成棕黃色的梭型細胞，胞漿中沿細胞縱軸密集排列的束狀肌絲被染成棕黃色。
　　 2、VSMC生長曲線：VSMC生長曲線近似“S”形，傳代后第1天細胞數(shù)有所減少，后進入對數(shù)生長期，第4天達到高峰，繼而進入平臺期。
　　 3、（-）Doxazosin、（+）doxazosin和（±）doxazosin對VSMC增殖的影響：與溶媒組相比，10～30μmol·L-1濃度的（-

6、）Doxazosin和（±）doxazosin作用于VSMCs48h或72h，顯著抑制大鼠胸主動脈VSMCs增殖；而（+）doxazosin僅在30μmol·L-1具有抑制作用。當延長藥物與VSMCs的作用時間至96 h時，（-）Doxazosin、（+）doxazosin和（±）doxazosin在3～30μmol·L-1濃度均顯著抑制主動脈VSMCs增殖；但是，（-）Doxazosin的抑制作用顯著強于同濃度（+）doxazosin

7、（n=6，P<0.05或0.01），與同濃度（±）doxazosin的抑制作用無顯著差別。不同濃度（-）Doxazosin、（+）doxazosin和（±）doxazosin作用于大鼠胸主動脈VSMCs48h、72h、96h時，（-）doxazosin、（+）doxazosin和（±）doxazosin對VSMCs增殖的抑制作用均具有濃度依賴性。以相同濃度的藥物處理大鼠胸主動脈VSMCs48 h、72 h和96h，96h時三種藥物對主動

8、脈VSMCs增殖的抑制率均高于48h和72h。以不同濃度的藥物處理大鼠胸主動脈VSMCs96 h，（+）Doxazosin的IC40值顯著大于（±）doxazosin和（-）doxazosin（n=3，P<0.01）。
　　 4、（±）Doxazosin及其光學異構(gòu)體的抗VSMCs增殖作用與α1受體的相關(guān)性研究：在酚芐明干預后，（-）Doxazosin、（+）doxazosin和（±）doxazosin作用于大鼠VSMCs48

9、h，亦均能顯著抑制大鼠VSMCs的增殖。（-）Doxazosin、（+）doxazosin和（±）doxazosin對VSMCs的抑制率分別為33.24±7.79％、24.12±10.14％和30.60±5.11％。（-）Doxazosin的作用有高于（+）doxazosin的趨勢，但三種藥物相比，無顯著性差異（P>0.05）。其OD490nm值分別為0.24±0.03、0.27±0.04和0.25±0.02。在分別用溶媒Ⅰ（雙蒸水）、

10、溶媒Ⅱ（乙醇）和酚芐明處理細胞后，測得（-）Doxazosin對細胞的OD值分別為0.23±0.01、0.24±0.03和0.24±0.03；抑制率分別為33.00±2.79％、32.87±7.20％和33.24±7.79％。三者比較均無顯著性差異；（+）Doxazosin和（±）doxazosin也得到同樣的結(jié)果。
　　 5、（-）Doxazosin、（+）doxazosin和（±）doxazosin對VSMC細胞形態(tài)學的影響

11、：VSMCs經(jīng)藥物處理后，可見細胞形態(tài)改變，呈多角形，與周鄰細胞脫離，細胞內(nèi)有細小顆粒出現(xiàn)，胞壁加厚，輪廓清晰，部分細胞皺縮呈球形。
　　 結(jié)論：本文首次研究了多沙唑嗪（±）Doxazosin及其光學異構(gòu)體對大鼠主動脈VSMCs增殖的抑制作用，得出以下結(jié)論：
　　 （±）Doxazosin、（+）doxazosin和（-）doxazosin呈濃度和時間依賴性的抑制大鼠主動脈。VSMCs增殖，并且具有化學結(jié)構(gòu)的立體選擇性，