性別與食管靜脈曲張破裂出血的關(guān)系及雌激素對門脈高壓大鼠食管下段粘膜下靜脈的影響的研究.pdf

1、本研究分為三部分： 第一部分：肝硬化食管靜脈曲張破裂出血危險因素分析 目的：探討性別因素在肝硬化食管靜脈曲張破裂出血中的統(tǒng)計學(xué)意義。 方法：總結(jié)1987年4月～2008年1月于解放軍總醫(yī)院消化科住院的肝硬化食管靜脈曲張出血患者資料，記錄患者年齡和性別。對2006年1月～2008年1月符合納入條件的病例分析，進(jìn)行分組。A組：有食管靜脈曲張出血病史，但入院前三月未再次出血，病情相對穩(wěn)定者；B組：食管靜脈曲張無出血史患

2、者，然后把A組和B組中按絕經(jīng)年齡分層，拆分為A1≤(50歲)，A2(＞50歲)，B1≤(50歲)和B2(＞50)歲組。采集患者的年齡、性別、肝功能Child-pugh分級、食管靜脈曲張分期、紅色征、是否伴有胃靜脈曲張、門靜脈主干內(nèi)徑、血清總膽紅素、白蛋白水平和血小板計數(shù)。實驗數(shù)據(jù)采用SPSS13.0 for Windows統(tǒng)計軟件進(jìn)行l(wèi)ogistic回歸模型分析影響肝硬化患者食管靜脈曲張破裂出血的主要因素。 結(jié)果：對1987年4

3、月～2008年1月納入研究的2008例食管靜脈曲張出血患者初步調(diào)查發(fā)現(xiàn)：15歲前男女患者比例為1.11：1；15歲至50歲男女患者比例為5：1；50歲后男女患者比例為2.39：1。將2006年1月～2008年1月符合納入條件共92例臨床資料，進(jìn)行Logistic回歸分析發(fā)現(xiàn)紅色征和肝功Child-pugh分級對食管靜脈曲張出血的影響具有統(tǒng)計學(xué)意義(X2=5.146，P=0.023；X2=9.158，P=0.003)。對年齡小于50歲的5

4、3例患者進(jìn)行Logistic回歸分析發(fā)現(xiàn)性別、紅色征和肝功Child-pugh分級對食管靜脈曲張出血的影響具有統(tǒng)計學(xué)意義(X2=4.163，P=0.041；X2=4.163，P=0.041；X2=6.506，P=0.011；)。對年齡大于50歲的39例患者進(jìn)行Logistic回歸分析發(fā)現(xiàn)肝功Child-pugh分級和血小板對食管靜脈曲張出血的影響較為顯著但不具有統(tǒng)計學(xué)意義(X2=3.179，P=0.075；X2=3.229，P=0.07

5、2)。 結(jié)論：1、肝硬化食管靜脈曲張出血患者中性別比例在絕經(jīng)期前后存在不同。50歲以前男性患者比例明顯高于女性；50歲后女性患者比例有所升高，男性患者比例下降。2、肝功能Child-pugh分級是肝硬化食管靜脈曲張出血獨立危險因素。絕經(jīng)期前性別和紅色征也是食管靜脈曲張出血的獨立危險因素。 第二部分：雌激素對門脈高壓大鼠門靜脈壓力、食管粘膜下靜脈血管形態(tài)和血管平滑肌細(xì)胞表型的影響 目的：通過門靜脈結(jié)扎兩步法和左側(cè)腎

6、上腺靜脈結(jié)扎誘導(dǎo)建立SD大鼠門脈高壓食管靜脈曲張模型，探討大鼠食管靜脈曲張形成過程中雌激素對門靜脈壓力、食管靜脈形態(tài)和VSMC細(xì)胞表型的影響。 方法：隨機挑選80只雌性SD大鼠，分為4組，每組20只。A組，單純分離門靜脈，左側(cè)腎上腺靜脈和卵巢不進(jìn)行結(jié)扎；B組，行門靜脈結(jié)扎兩步法和左側(cè)腎上腺靜脈結(jié)扎；C組，行門靜脈結(jié)扎兩步法和左側(cè)腎上腺靜脈結(jié)扎加卵巢切除；D組行門靜脈結(jié)扎兩步法和左側(cè)腎上腺靜脈結(jié)扎加卵巢切除并行雌激素替代療法。所有

7、動物均正常喂養(yǎng)。門靜脈完全結(jié)扎術(shù)后第1天、3天、7天、15天和30天檢測門靜脈壓力后，處死大鼠，4％多聚甲醛灌流固定，獲得食管靜脈曲張標(biāo)本。HE染色觀察各組粘膜層血管形態(tài)。免疫組織化學(xué)法檢測對照組和實驗組曲張食管靜脈α-SMA和Desmin的表達(dá)情況。應(yīng)用Image-Pro-Plus6.0軟件檢測染色切片的OD值。實驗數(shù)據(jù)采用SPSS13.0 for Windows統(tǒng)計軟件進(jìn)行統(tǒng)計分析。 結(jié)果：術(shù)后各實驗組均出現(xiàn)食管靜脈曲張的病

8、理改變。門靜脈完全結(jié)扎術(shù)后第1～30天各實驗組大鼠門靜脈壓力較對照組均明顯增高，有統(tǒng)計學(xué)意義；實驗組間比較無統(tǒng)計學(xué)意義。術(shù)后第1天，實驗組血管數(shù)目、血管總截面積及血管平均截面積與對照組比較，無統(tǒng)計學(xué)意義；實驗組間比較無統(tǒng)計學(xué)意義。術(shù)后第3、7、15、30天實驗組在血管數(shù)量、血管總截面積、平均血管截面積方面與對照組相比有統(tǒng)計學(xué)意義。術(shù)后第3天B組與C組在血管數(shù)量方面比較有統(tǒng)計學(xué)意義。術(shù)后第7、15、30天B組與C組在血管總截面積、平均血管

9、截面積相比有統(tǒng)計學(xué)意義。余不同時間點實驗組間各相關(guān)指標(biāo)比較均無統(tǒng)計學(xué)意義。α-SMA和Desmin在食管下段粘膜下靜脈表達(dá)情況在術(shù)后第1天各實驗組與對照組相比均無統(tǒng)計學(xué)意義；實驗組間比較無統(tǒng)計學(xué)意義。術(shù)后第15天，各實驗組與對照組相比均有統(tǒng)計學(xué)意義；實驗組間比較無統(tǒng)計學(xué)意義。術(shù)后第30天，各實驗組與對照組相比均有統(tǒng)計學(xué)意義；B組與C組、C組與D組比較有統(tǒng)計學(xué)意義；B組與D組比較無統(tǒng)計學(xué)意義。 結(jié)論：1、門靜脈結(jié)扎兩步法加左腎上腺

10、靜脈結(jié)扎的方法可制備大鼠門脈高壓食管靜脈曲張的模型。2、食管靜脈曲張形成過程中，血管平滑肌細(xì)胞出現(xiàn)表型變化，與曲張的血管結(jié)構(gòu)改建有關(guān)。3、α-SMA和Desmin表達(dá)水平變化與雌激素水平有一定的聯(lián)系。4、靜脈曲張形成后，雌激素能夠促進(jìn)血管成熟，結(jié)構(gòu)穩(wěn)定，可能與防止出血有關(guān)。 第三部分：雌激素和他莫昔芬對體外培養(yǎng)大鼠血管平滑肌細(xì)胞雌激素受體α和細(xì)胞表型的影響 目的：探討17β-雌二醇和他莫昔芬對體外培養(yǎng)雌性大鼠ERs和VS

11、MC表型的影響。 方法：體外培養(yǎng)雌性大鼠VSMC。實驗分為17β雌二醇E2(1)10-9M、E2(2)10-8M和E2(3)10-7M；TAM(1)10-8M、TAM(2)10-7M和TAM(3)10-6M；TAM10-6M+E2(3)10-7M組；CON組。作用24h提取總RNA，RT-PCR分析ERα和α-SMA mRNA片段相對濃度。 結(jié)果： E2(1)、E2(2)和E2(3)組均促進(jìn)ERα的表達(dá)(F=25.139

12、，P＜0.001)，而各濃度的TAM不影響VSMC ERα表達(dá)水平，但是10-6TAM可以阻斷10-7M的17β-雌二醇促進(jìn)ERα表達(dá)作用。E2(1)、E2(2)和E2(3)組均可促進(jìn)α-SMA的表達(dá)(F=67.017，P＜0.001)。而各濃度TAM不影響VSMCα-SMA的表達(dá)，并且10-7M的17β-雌二醇促進(jìn)α-SMA表達(dá)作用可被10-6M的TAM阻斷。 結(jié)論：1．雌激素可以促進(jìn)體外培養(yǎng)VSMC由合成型向收縮型轉(zhuǎn)變。2．