內(nèi)皮抑素基因?qū)侨饬鯱MR106細(xì)胞生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移的影響.pdf

1、目的: 1、探討內(nèi)皮抑素(ES)基因?qū)侨饬鲅苌傻淖饔茫?2、探討內(nèi)皮抑素基因?qū)侨饬錾L(zhǎng)和轉(zhuǎn)移的影響。 方法: 1、pBudCE4.1/ES重組質(zhì)粒在體外擴(kuò)增、抽提并酶切和測(cè)序鑒定； 2、體外培養(yǎng)骨肉瘤細(xì)胞株UM106細(xì)胞，應(yīng)用脂質(zhì)體法進(jìn)行ES基因轉(zhuǎn)染，Zeocin抗性篩選獲得陽(yáng)性細(xì)胞克隆(ES-UMR106細(xì)胞)，以未轉(zhuǎn)染UM106細(xì)胞為對(duì)照，MTT法繪制生長(zhǎng)曲線(xiàn)，觀察ES基因?qū)M106

2、細(xì)胞增殖能力的影響； 3、應(yīng)用ELISA法檢測(cè)陽(yáng)性細(xì)胞克隆的ES分泌情況； 4、取ES-LJMR106細(xì)胞培養(yǎng)液上清，用于血管內(nèi)皮細(xì)胞體外培養(yǎng)，觀察其對(duì)血管內(nèi)皮細(xì)胞體外增殖能力的影響以評(píng)估ES體外活性； 5、分別應(yīng)用ES-UMR106細(xì)胞和UMR106細(xì)胞制作裸鼠皮下腫瘤模型，觀察兩組動(dòng)物的腫瘤生長(zhǎng)、侵襲和轉(zhuǎn)移情況； 6、分別應(yīng)用ES-UMR106細(xì)胞和UMR106細(xì)胞尾靜脈注射制作裸鼠肺轉(zhuǎn)移腫瘤模型，觀

3、察兩組動(dòng)物肺轉(zhuǎn)移灶形成、數(shù)量和大小。 結(jié)果: 1、在體外擴(kuò)增pBudCE4.1/ES重組質(zhì)粒，酶切和測(cè)序鑒定為陽(yáng)性重組子； 2、對(duì)骨肉瘤UMR106細(xì)胞進(jìn)行成功轉(zhuǎn)染，可穩(wěn)定表達(dá)有生物活性的ES，對(duì)體外培養(yǎng)的血管內(nèi)皮細(xì)胞增殖具有抑制作用； 3、ES在體內(nèi)可以抑制皮下腫瘤的生長(zhǎng)，但沒(méi)有降低動(dòng)物的皮下成瘤率； 4、ES在體內(nèi)可抑制UM106細(xì)胞株肺轉(zhuǎn)移灶的形成和生長(zhǎng)。 結(jié)論: 1、應(yīng)用E