小麥木聚糖酶抑制劑TAXI-Ⅰ基因克隆表達(dá)及產(chǎn)物特性研究.pdf_第1頁(yè)
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1、浙江大學(xué)碩士學(xué)位論文小麥木聚糖酶抑制劑TAXIⅠ基因克隆表達(dá)及產(chǎn)物特性研究姓名：高慧申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：碩士專業(yè)：動(dòng)物營(yíng)養(yǎng)與飼料科學(xué)指導(dǎo)教師：孫建義20060501浙江大學(xué)碩士學(xué)位論文ABSTRACTB—l，4xylanases(EC32I8)cancatalyzethehydrolysisofxylan(themajorconstituentofhemicellulose)andplayasignificantroleinnaturebyr

2、ecyclinghemicelluloseTheyarewidelyappliedinanimalfeedandfoodindustriesandinbiobleachingHoweversubstanceswhichinhibitthehydrolyticactivityofendoxylanasesincerealsaffectthefunctionalityandperformanceoftheenzymesInthisstudy

3、，theTriticumaestivumxylanaseinhibitorI(TAXI—I)wasclonedandexpressedbyEscherichiacoliBL21XylanaseinhibitoractivitiesagainstxylanasewereanalysedwithapurposetoprovideatheoreticalbasisforanaccuratescreeningofxylanaseThemainr

4、esultswereasfollows：nleTriticumaestiVumxylanaseinhibitorI(TAXII，AJ438880)geneWasclonedaccordingtosecquenceinformationinGenBankThefragmentcontainingtheTAXI—IregionwasamplifiedbyPolymeraseChainReaction(PCR)frompUCmTTAXIVec

5、torbyusingpyrobesTMDNAPolymeraseandapairofprimes51AⅪ02副3TAXl02Ewhichwey／edesignedbyanalyzingtherestrictionsitemappingofTAXIandthemultiplecloningsite(MCS)ofvectorpET30a()，sointroducingEcoRlsiteat3endandXhoIsiteat5endofthe

6、geneTheresultingPCRproduct(1175bp)wassubclonedintopUCmTVectorthepositiveclonewasdoubledigestedbyEcoRIandXhoI，theDNAinsertwasligatedintotheEcoRI一勵(lì)oIcutsiteofpET30“)，constructingrecombinantvectorpET30計(jì))TAXIETherecombinantp

7、ET30a()TAXIEwastransformedintoEscherichiacoliBL21andtherecombinantswdteobtainedThespecificityofTAXI—Iindicatedthatxylanaseinhibitorhadamolecularweightof46。7KDaandtheactivitywasatitslowestat20℃Theinhibitoractivityascended

8、fastduring30minat20℃whileitsactivityhadnosignificantdiversificationin30minTheactivityincreasedgentlyafterbeingtreatedduringOC一70“Cfor30rainTAXIIinhibitdifferentendoxylanasestovaryingextentsHi曲inhibitionwasfoundagainstfun

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