CD200基因轉染的人胎盤間充質干細胞對異基因小鼠皮膚移植免疫排斥調節(jié)作用的研究.pdf

1、目的：研究CD200基因轉染的人胎盤間充質干細胞(HPMSCs)對異基因小鼠皮膚移植免疫排斥調節(jié)的作用,為進一步闡明CD200基因的免疫調節(jié)機制提供新線索。為了在動物模型中進行這一研究,在本課題中我們將用表達小鼠CD200基因的人胎盤間充質干細胞代替人CD200陽性間充質干細胞亞群,并將研究結果作為后續(xù)的直接用人CD200陽性人胎盤間充質干細胞亞群作人體條件的研究提供依據(jù)。
　　方法：構建表達小鼠CD200基因的重組腺病毒載體,并

2、用此載體轉染人胎盤間充質干細胞,建立表達小鼠CD200基因的人胎盤間充質干細胞。待表達小鼠CD200基因的胎盤間充質干細胞長至60~70％密度的時候,用Triple消化成單細胞懸液。選擇40只C57BL/6小鼠作為受體,以Vr:CD1(ICR)乳鼠皮膚作為供體,建立小鼠異基因皮膚移植排斥模型。C57BL/6小鼠隨機分為4組:①A組(空白對照組1):C57BL/6小鼠自體皮膚移植;②B組(對照組2):同種異基因移植+PBS尾靜脈注射;③C

3、組(對照組3):同種異基因移植+HPMSCs尾靜脈注射;④D組(實驗組):同種異基因移植+表達小鼠CD200的HPMSCs尾靜脈注射。檢測項目包括:移植皮片存活時間,HE染色觀察移植皮片病理改變,術后7d受體小鼠血液白細胞數(shù)量,腹腔液巨噬細胞活化率,ELISA、RT-PCR方法檢測受體小鼠血液、脾臟中IL-4、IL-17及IFN-γ表達量的變化。
　　結果：(1)經PCR、酶切、測序及GFP表達證實攜帶CD200基因的重組腺病毒載

4、體rAd-4-mCD200構建成功。(2)GFP、Real-TimePCR檢測rAd-4-mCD200轉染的人胎盤間充質干細胞可以成功表達mCD200基因。(3)皮膚移植術后7d,移植皮片存活情況觀察C組較B組移植皮片存活時間延長(p<0.001);D組較B組和C組移植皮片存活時間延長(p<0.001,p<0.001)。HE染色結果顯示,D組較B組小鼠皮膚炎細胞浸潤明顯減少。移植后7d受體小鼠血液中白細胞計數(shù)D組較A組和B組白細胞數(shù)量明

5、顯減少(p<0.05,p<0.05)。C組和D活化型巨噬細胞的數(shù)量明顯多于A組和B組(p<0.05,p<0.05,p<0.05,p<0.05)。ELISA檢測結果表明:C組和D組較A組IL-4含量明顯減少(p<0.05,p<0.05);C組和B組比較,IL-17和IFN-γ含量明顯降低(p<0.01,p<0.01);D組較B組,IL-17和IFN-γ含量明顯降低(p<0.001,p<0.001);D組和A組比較,IL-17含量明顯降低(

6、p<0.01)。RT-PCR測定結果表明,C組IL-4、IL-17和IFN-γ的分泌量明顯低于B組(p<0.05,p<0.01,p<0.01);D組較B組,IL-4、IL-17和IFN-γ的分泌量明顯降低(p<0.01,p<0.01,p<0.01);C組和D組的IFN-γ的分泌量也明顯低于A組(p<0.01,p<0.05)。
　　結論：成功制備表達小鼠CD200基因的重組腺病毒rAd-4-mCD200。此病毒能在人胎盤間充質干細胞