鞘內注射氧化槐定堿的鎮(zhèn)痛作用及對中樞GABAA受體的影響.pdf

1、目的：觀察鞘內注射（intrathecalinjection,ith）氧化槐定堿（oxysophoridine,OSR）的鎮(zhèn)痛作用，分析γ-氨基丁酸受體（γ-aminobutyricacidreceptor,GABA受體）激動劑和拮抗劑對其鎮(zhèn)痛作用的影響，探討OSR對中樞GABAARα1受體基因和蛋白表達變化的影響并分析OSR鎮(zhèn)痛作用的分子機制。
　　方法：1.行為藥理學方法①采用小鼠溫浴致痛法以熱甩尾潛伏期為指標觀察ith和iv

2、OSR的鎮(zhèn)痛作用；②采用GABA受體激動劑和拮抗劑觀察其對OSR在小鼠溫浴熱甩尾反應中痛閾變化的影響，分析GABA受體在OSR鎮(zhèn)痛中的作用。
　　2.實時定量RT-PCR方法檢測OSR對福爾馬林致痛小鼠脊髓背角和腦GABAARα1受體mRNA表達的影響，分析OSR鎮(zhèn)痛作用與GABAARα1基因表達量的關系。
　　3.Westernblot方法檢測OSR對福爾馬林致痛小鼠脊髓背角和腦GABAARα1蛋白含量的影響，分析脊髓背角

3、和腦GABAARα1蛋白表達量對OSR鎮(zhèn)痛作用的影響。
　　4.免疫組織化學方法（SABC法）測定OSR對小鼠脊髓背角GABAARα1免疫陽性細胞數目的影響，分析OSR鎮(zhèn)痛作用與脊髓背角GABAARα1免疫陽性細胞變化的關系。
　　結果：1.鞘內注射OSR的鎮(zhèn)痛作用OSR（12.5,6.25mg/kg,ith）能明顯延長小鼠溫浴熱甩尾在10、20、30、45、60min的潛伏期(P<0.05,P<0.01)，最大痛閾提高率可

4、達68.45％。
　　2.GABAA受體激動劑和拮抗劑對OSR鎮(zhèn)痛作用的影響GABA(1.6mg/kg,icv)和蠅蕈醇（muscimol,MUS,0.1μg/mouse,icv）可明顯提高閾下鎮(zhèn)痛劑量OSR(3.13mg/kg,ith)在小鼠溫浴熱甩尾反應中的痛閾(P<0.05,P<0.01)；印防及毒素(picrotoxin,PTX,2mg/kg,ip)及荷包牡丹堿（bicuculine,BIC,0.2μg/mouse,ip）

5、均可顯著對抗OSR（6.25mg/kg,ith）的鎮(zhèn)痛作用(P<0.05,P<0.01)；提示GABAA受體參與了OSR的鎮(zhèn)痛作用。
　　3.OSR對小鼠脊髓背角GABAARα1免疫陽性細胞數目的影響OSR（12.5mg/kg,ith）可使小鼠脊髓背角GABAARα1免疫陽性細胞表達顯著增多(P<0.01)，平均灰度值顯著降低（P<0.01）；提示OSR的鎮(zhèn)痛作用與調節(jié)脊髓背角GABAARα1免疫陽性細胞表達有關。
　　4.

6、OSR對福爾馬林致痛小鼠脊髓背角和腦GABAARα1mRNA及蛋白表達的影響OSR（12.5mg/kg,ith）可明顯增加福爾馬林致痛小鼠脊髓背角和腦GABAARα1mRNA和蛋白的表達(P<0.01)；OSR（500mg/kg,iv）也可引起類似改變，提示脊髓背角和腦GABAARα1的基因和蛋白表達變化是參與OSR鎮(zhèn)痛作用的分子機制。
　　結論：OSR具有明顯鎮(zhèn)痛作用，GABAA受體參與了OSR的鎮(zhèn)痛機制。OSR鎮(zhèn)痛作用的分子機