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文檔簡介
1、目的:觀察鞘內(nèi)注射(intrathecalinjection,ith)氧化槐定堿(oxysophoridine,OSR)的鎮(zhèn)痛作用,分析γ-氨基丁酸受體(γ-aminobutyricacidreceptor,GABA受體)激動(dòng)劑和拮抗劑對其鎮(zhèn)痛作用的影響,探討OSR對中樞GABAARα1受體基因和蛋白表達(dá)變化的影響并分析OSR鎮(zhèn)痛作用的分子機(jī)制。
方法:1.行為藥理學(xué)方法①采用小鼠溫浴致痛法以熱甩尾潛伏期為指標(biāo)觀察ith和iv
2、OSR的鎮(zhèn)痛作用;②采用GABA受體激動(dòng)劑和拮抗劑觀察其對OSR在小鼠溫浴熱甩尾反應(yīng)中痛閾變化的影響,分析GABA受體在OSR鎮(zhèn)痛中的作用。
2.實(shí)時(shí)定量RT-PCR方法檢測OSR對福爾馬林致痛小鼠脊髓背角和腦GABAARα1受體mRNA表達(dá)的影響,分析OSR鎮(zhèn)痛作用與GABAARα1基因表達(dá)量的關(guān)系。
3.Westernblot方法檢測OSR對福爾馬林致痛小鼠脊髓背角和腦GABAARα1蛋白含量的影響,分析脊髓背角
3、和腦GABAARα1蛋白表達(dá)量對OSR鎮(zhèn)痛作用的影響。
4.免疫組織化學(xué)方法(SABC法)測定OSR對小鼠脊髓背角GABAARα1免疫陽性細(xì)胞數(shù)目的影響,分析OSR鎮(zhèn)痛作用與脊髓背角GABAARα1免疫陽性細(xì)胞變化的關(guān)系。
結(jié)果:1.鞘內(nèi)注射OSR的鎮(zhèn)痛作用OSR(12.5,6.25mg/kg,ith)能明顯延長小鼠溫浴熱甩尾在10、20、30、45、60min的潛伏期(P<0.05,P<0.01),最大痛閾提高率可
4、達(dá)68.45%。
2.GABAA受體激動(dòng)劑和拮抗劑對OSR鎮(zhèn)痛作用的影響GABA(1.6mg/kg,icv)和蠅蕈醇(muscimol,MUS,0.1μg/mouse,icv)可明顯提高閾下鎮(zhèn)痛劑量OSR(3.13mg/kg,ith)在小鼠溫浴熱甩尾反應(yīng)中的痛閾(P<0.05,P<0.01);印防及毒素(picrotoxin,PTX,2mg/kg,ip)及荷包牡丹堿(bicuculine,BIC,0.2μg/mouse,ip)
5、均可顯著對抗OSR(6.25mg/kg,ith)的鎮(zhèn)痛作用(P<0.05,P<0.01);提示GABAA受體參與了OSR的鎮(zhèn)痛作用。
3.OSR對小鼠脊髓背角GABAARα1免疫陽性細(xì)胞數(shù)目的影響OSR(12.5mg/kg,ith)可使小鼠脊髓背角GABAARα1免疫陽性細(xì)胞表達(dá)顯著增多(P<0.01),平均灰度值顯著降低(P<0.01);提示OSR的鎮(zhèn)痛作用與調(diào)節(jié)脊髓背角GABAARα1免疫陽性細(xì)胞表達(dá)有關(guān)。
4.
6、OSR對福爾馬林致痛小鼠脊髓背角和腦GABAARα1mRNA及蛋白表達(dá)的影響OSR(12.5mg/kg,ith)可明顯增加福爾馬林致痛小鼠脊髓背角和腦GABAARα1mRNA和蛋白的表達(dá)(P<0.01);OSR(500mg/kg,iv)也可引起類似改變,提示脊髓背角和腦GABAARα1的基因和蛋白表達(dá)變化是參與OSR鎮(zhèn)痛作用的分子機(jī)制。
結(jié)論:OSR具有明顯鎮(zhèn)痛作用,GABAA受體參與了OSR的鎮(zhèn)痛機(jī)制。OSR鎮(zhèn)痛作用的分子機(jī)
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