福辛普利對糖尿病腎病大鼠保護作用的機制研究.pdf

1、目的:目前全世界尤其是我國的糖尿病患者人數(shù)快速增長，糖尿病腎?。―iabetic nephropathy，DN）作為糖尿病的重要微血管并發(fā)癥之一，因其能夠導致患者慢性腎損害，直至腎功能衰竭而日益受到關注。目前認為血管緊張素轉換酶抑制劑(angiotensin converting enzyme inhibitors，ACEI)能夠減少尿蛋白，并且延緩腎病進展，表現(xiàn)出明顯的腎保護作用，因而作為腎保護藥物在臨床治療中廣泛應用，但其腎保護作用

2、機制目前尚未被完全闡明。故本研究擬通過分析ACEI類藥物—福辛普利對糖尿病大鼠血生化指標、24小時尿蛋白定量、腎皮質病理形態(tài)學以及腎皮質蛋白質譜的影響，以期發(fā)現(xiàn)ACEI新的作用機制。
　　方法:本實驗采用能夠自發(fā)出現(xiàn)2型糖尿病和糖尿病腎病的大鼠(OLETF)作為研究對象，與OLETF大鼠其遺傳背景相似、同周齡及性別，但非自發(fā)糖尿病的LETO大鼠作為空白對照。實驗動物共分為3組:空白對照組（LETO大鼠），模型組（OLETF大鼠），

3、福辛普利組（應用福辛普利治療OLETF大鼠）。每4周測量各組動物的血糖、24小時尿蛋白;在36周和56周時分2次處死動物取材，檢測血生化指標，并且半定量評價腎小球和腎小管間質病理變化。另一方面分離腎皮質，分別提取胞漿和胞膜的總蛋白，進一步將獲得的蛋白樣品經雙向電泳(2-DE)分離，以膠體考馬斯亮藍染色顯示后，電泳凝膠圖像掃描輸入計算機，用ImageMaster圖像分析軟件進行分析。確認組間差異蛋白點后，將凝膠中的差異蛋白點切出，經酶解和

4、基質輔助激光解吸電離飛行時間質譜(Matrix-Assisted Laser Desorption/Ionization Time-Of-Flight Mass Spectrometry,MALDI-TOF-MS)鑒定，獲得肽質量指紋譜(Peptide-Mass Finger Printing，PMF)。然后以所得的的PMF在matrixscience數(shù)據(jù)庫內進行檢索所以判定差異蛋白，并以GoMiner軟件進行評價。
　　結果:模

5、型組大鼠的血糖及24小時尿蛋白水平從6周齡起與空白對照組大鼠相比有顯著升高，且隨時間推移呈進行性加重，說明糖尿病腎病的模型成功建立。福辛普利組大鼠與模型組大鼠相比，其24小時尿蛋白水平，腎小球硬化指數(shù)顯著降低。另一方面，蛋白質組學的研究結果顯示，福辛普利組大鼠與模型組大鼠相比，在36周和56周，有17種腎皮質組織蛋白的豐度發(fā)生了顯著變化。在36周時GPX3和PDHB上調;而DPYS12，PBLD，F(xiàn)AHD1和selenium bindi

6、ngprotein2則有下調。在56周時HSPA9，APOA1，GPX3，F(xiàn)BP1，ESD和MDH1上調;而DPYS12，PGK1，ECHS1，PBLD，ETFA，F(xiàn)AHD1，NME2和seleniumbinding protein2則有下調。這些蛋白的功能是參與氧化應激，凋亡，糖和脂肪代謝等生物學過程。
　　結論:福辛普利能夠顯著降低自發(fā)糖尿病腎病大鼠的尿蛋白排泄量和減輕其腎小球硬化，顯示出良好的腎保護作用。這種治療作用可能是通