福辛普利對(duì)糖尿病腎病大鼠保護(hù)作用的機(jī)制研究.pdf

1、目的:目前全世界尤其是我國的糖尿病患者人數(shù)快速增長，糖尿病腎?。―iabetic nephropathy，DN）作為糖尿病的重要微血管并發(fā)癥之一，因其能夠?qū)е禄颊呗阅I損害，直至腎功能衰竭而日益受到關(guān)注。目前認(rèn)為血管緊張素轉(zhuǎn)換酶抑制劑(angiotensin converting enzyme inhibitors，ACEI)能夠減少尿蛋白，并且延緩腎病進(jìn)展，表現(xiàn)出明顯的腎保護(hù)作用，因而作為腎保護(hù)藥物在臨床治療中廣泛應(yīng)用，但其腎保護(hù)作用

2、機(jī)制目前尚未被完全闡明。故本研究擬通過分析ACEI類藥物—福辛普利對(duì)糖尿病大鼠血生化指標(biāo)、24小時(shí)尿蛋白定量、腎皮質(zhì)病理形態(tài)學(xué)以及腎皮質(zhì)蛋白質(zhì)譜的影響，以期發(fā)現(xiàn)ACEI新的作用機(jī)制。
　　方法:本實(shí)驗(yàn)采用能夠自發(fā)出現(xiàn)2型糖尿病和糖尿病腎病的大鼠(OLETF)作為研究對(duì)象，與OLETF大鼠其遺傳背景相似、同周齡及性別，但非自發(fā)糖尿病的LETO大鼠作為空白對(duì)照。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物共分為3組:空白對(duì)照組（LETO大鼠），模型組（OLETF大鼠），

3、福辛普利組（應(yīng)用福辛普利治療OLETF大鼠）。每4周測(cè)量各組動(dòng)物的血糖、24小時(shí)尿蛋白;在36周和56周時(shí)分2次處死動(dòng)物取材，檢測(cè)血生化指標(biāo)，并且半定量評(píng)價(jià)腎小球和腎小管間質(zhì)病理變化。另一方面分離腎皮質(zhì)，分別提取胞漿和胞膜的總蛋白，進(jìn)一步將獲得的蛋白樣品經(jīng)雙向電泳(2-DE)分離，以膠體考馬斯亮藍(lán)染色顯示后，電泳凝膠圖像掃描輸入計(jì)算機(jī)，用ImageMaster圖像分析軟件進(jìn)行分析。確認(rèn)組間差異蛋白點(diǎn)后，將凝膠中的差異蛋白點(diǎn)切出，經(jīng)酶解和

4、基質(zhì)輔助激光解吸電離飛行時(shí)間質(zhì)譜(Matrix-Assisted Laser Desorption/Ionization Time-Of-Flight Mass Spectrometry,MALDI-TOF-MS)鑒定，獲得肽質(zhì)量指紋譜(Peptide-Mass Finger Printing，PMF)。然后以所得的的PMF在matrixscience數(shù)據(jù)庫內(nèi)進(jìn)行檢索所以判定差異蛋白，并以GoMiner軟件進(jìn)行評(píng)價(jià)。
　　結(jié)果:模

5、型組大鼠的血糖及24小時(shí)尿蛋白水平從6周齡起與空白對(duì)照組大鼠相比有顯著升高，且隨時(shí)間推移呈進(jìn)行性加重，說明糖尿病腎病的模型成功建立。福辛普利組大鼠與模型組大鼠相比，其24小時(shí)尿蛋白水平，腎小球硬化指數(shù)顯著降低。另一方面，蛋白質(zhì)組學(xué)的研究結(jié)果顯示，福辛普利組大鼠與模型組大鼠相比，在36周和56周，有17種腎皮質(zhì)組織蛋白的豐度發(fā)生了顯著變化。在36周時(shí)GPX3和PDHB上調(diào);而DPYS12，PBLD，F(xiàn)AHD1和selenium bindi

6、ngprotein2則有下調(diào)。在56周時(shí)HSPA9，APOA1，GPX3，F(xiàn)BP1，ESD和MDH1上調(diào);而DPYS12，PGK1，ECHS1，PBLD，ETFA，F(xiàn)AHD1，NME2和seleniumbinding protein2則有下調(diào)。這些蛋白的功能是參與氧化應(yīng)激，凋亡，糖和脂肪代謝等生物學(xué)過程。
　　結(jié)論:福辛普利能夠顯著降低自發(fā)糖尿病腎病大鼠的尿蛋白排泄量和減輕其腎小球硬化，顯示出良好的腎保護(hù)作用。這種治療作用可能是通