白囊耙齒菌（Irpex lacteus）漆酶基因的克隆及相關(guān)序列的分析.pdf

1、漆酶是一種含銅多酚氧化酶，在白腐菌中普遍存在，因其具有降解廢水中含酚化合物，苯氧基類除草劑，石油工業(yè)污染物的能力和紙漿的生物漂白作用，因而受到人們的廣泛關(guān)注。盡管漆酶的應(yīng)用已取得一定突破性進展，但由于大多數(shù)白腐菌是好氧型真菌，屬擔子菌類，在水中的生長速度較慢，且易結(jié)球結(jié)塊，僅能生活在水體表面，影響對水體污染物質(zhì)處理的能力，進而限制了白腐菌的直接應(yīng)用。目前研究白腐菌漆酶結(jié)構(gòu)基因，對今后培育白腐菌漆酶基因大量表達的工程菌株和用工程菌株處理酚

2、類污染物等具有十分重要的意義。本文以34種實驗室分離、純化后的大型白腐真菌為研究對象，測定了它們各自的漆酶活性，其中白囊耙齒菌、環(huán)帶干酪菌、血紅密孔菌、櫟迷孔菌等4個菌種生長快，Laccase活性較強，并對白囊耙齒菌漆酶基因進行了克隆和序列分析。目的在于克隆白腐菌漆酶基因，從而為漆酶的基因工程提供基因材料。主要實驗結(jié)果如下： (1)根據(jù)丁香醛連氮法對保存菌種進行漆酶活性測定，結(jié)果有14個菌種具有漆酶活性，全部為白腐菌，包括裂蹄木

3、層孔菌、朱紅密孔菌、環(huán)帶干酪菌、櫟迷孔菌、三色革裥菌、北方棱孔菌、樺革裥菌、血紅密孔菌、樺癌褐孔菌、白囊耙齒菌、棱孔菌、單色下皮黑、1999-32、紫隔孢伏革。 (2)建立了快速的絲狀真菌RNA的提取方法，該法操作簡單，需時短，得到的RNA完整性、均一性好，可滿足分子生物學的各項要求。 (3)利用正交實驗的方法，確定了白囊耙齒菌RT-PCR最佳反應(yīng)體系：10×Buffer2.0μL，MgCl22.0mM，dNTPs200