HPV-CT重組真核表達(dá)質(zhì)粒的構(gòu)建和小鼠生殖道CT感染模型的建立.pdf

1、溫州醫(yī)學(xué)院碩士學(xué)位論文HPV-CT重組真核表達(dá)質(zhì)粒的構(gòu)建和小鼠生殖道CT感染模型的建立姓名：王樂丹申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：碩士專業(yè)：婦產(chǎn)科學(xué)（性傳播疾病）指導(dǎo)教師：張麗芳;呂杰強(qiáng)20060301溫州醫(yī)學(xué)院碩士學(xué)位論文C ’l ’o[ 3 】 分別用1 0 7 、1 0 5 、1 0 3 數(shù)量I F U 的c T D 型株陰道內(nèi)接種雌性C 5 7 B L ／6 小鼠，接種后每隔7 d 取陰道宮頸拭子作細(xì)胞培養(yǎng)分離C T ，并進(jìn)行包涵體形成單位( I

2、 F U ) 記數(shù)，連續(xù)觀察5 周。結(jié)果：[ 1 】 經(jīng)酶切和測(cè)序鑒定，獲得了重組真核表達(dá)質(zhì)粒p c D N A 3 ．1 ( + ) ／H P V 6 b L l ／C TM O M P l 5 5 ．i 6 3 。轉(zhuǎn)染哺乳細(xì)胞C O S 一7 后，通過(guò)S D S ．P A G E 和W e s t e r nb l o t 分析鑒定，在真核細(xì)胞內(nèi)成功表達(dá)了分子量約為5 6 K D a 的嵌合蛋白。[ 2 】 用G i e m s a

3、 染色、免疫層析法和核苷酸序列檢測(cè)對(duì)沙眼衣原體進(jìn)行鑒定，結(jié)果均呈陽(yáng)性，證實(shí)沙眼衣原體培養(yǎng)成功，并經(jīng)離心獲得了具有高度感染活性的沙眼衣原體。[ 3 】 分別用1 0 7 、1 0 5 和1 0 3 I F U 的c T 接種小鼠，發(fā)現(xiàn)在接種后的7 ～1 4 d 均可在小鼠生殖道分離得到具感染性的C T ，但其持續(xù)排菌時(shí)期與接種的I F U 數(shù)量成正比，分別為3 5 、2 8 、2 1 d ；且小鼠生殖道排菌量( I F U ) 與接種的I

4、 F U數(shù)量亦成正比，以1 0 7 和1 0 5 劑量組為高( 在7 ～1 4 d 分別可達(dá)1 0 4 和1 0 3 ) 。結(jié)論：【1 ] 成功構(gòu)建了H P V 6 b L l ／c T - M O M P l 5 5 _ 1 6 3 嵌合基因真核表達(dá)質(zhì)粒，并在哺乳細(xì)胞中表達(dá)了嵌合蛋白。為研究H P V - C T 嵌合真核基因免疫效應(yīng)提供實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)?！? ] 成功增殖培養(yǎng)和純化C TD 型株，為建立小鼠生殖道C T 感染模型打下了基礎(chǔ)。