糖腎飲對(duì)糖尿病腎病大鼠的保護(hù)作用及其機(jī)理探討.pdf

1、目的：糖尿病腎?。╠iabetic nephropathy，DN）是糖尿病的主要微血管并發(fā)癥，也是導(dǎo)致終末期腎?。╡nd stage renal disease，ESRD）的最常見(jiàn)病因，嚴(yán)重危害著人類(lèi)健康。其發(fā)病機(jī)制復(fù)雜，是糖代謝紊亂及其所導(dǎo)致的血流動(dòng)力學(xué)改變、細(xì)胞因子、生長(zhǎng)因子等多因素綜合作用的結(jié)果。近年來(lái)，對(duì)細(xì)胞內(nèi)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)的研究揭示，二脂酰甘油-蛋白激酶C（diacylglycerol-protein kinase C，DAG-PK

2、C）信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑異常在糖尿病腎病的發(fā)生發(fā)展中起著重要作用。高血糖狀態(tài)和血管緊張素Ⅱ（angiotensinⅡ，AngⅡ）均可以激活蛋白激酶C，其中血管緊張素Ⅱ可以通過(guò)血管緊張素1型受體（angiotensin type1 receptor，ATI）介導(dǎo)激活蛋白激酶C，蛋白激酶C活化后可引起各種酶及細(xì)胞因子活性、蛋白質(zhì)合成及細(xì)胞功能的改變，包括上調(diào)轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β1（transforming growth factor-β1，TGF-β1）

3、和細(xì)胞外基質(zhì)（extracellular matrix，ECM）的轉(zhuǎn)錄，轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β1在糖尿病腎病相關(guān)的生長(zhǎng)因子網(wǎng)絡(luò)中處于中心地位，可促進(jìn)糖尿病腎臟細(xì)胞肥大及細(xì)胞外基質(zhì)的形成，從而促進(jìn)糖尿病腎病發(fā)生、發(fā)展。
　　 目前，糖尿病腎病尚無(wú)特效的治療方法，而中醫(yī)藥以其獨(dú)特的優(yōu)勢(shì)，在糖尿病腎病的防治中占有重要地位。本實(shí)驗(yàn)采用大鼠腹腔注射鏈脲佐菌素的方法，首先建立糖尿病動(dòng)物模型，進(jìn)而發(fā)展為糖尿病腎病，應(yīng)用糖腎飲對(duì)該模型進(jìn)行干預(yù)性治療，并

4、以血管緊張素轉(zhuǎn)化酶抑制劑貝那普利為對(duì)照，旨在通過(guò)觀察糖腎飲對(duì)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的24小時(shí)尿蛋白定量、糖化血紅蛋白、血脂、腎臟病理形態(tài)學(xué)以及血管緊張素Ⅱ、蛋白激酶C-β及轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β1的影響，探討中藥復(fù)方-糖腎飲對(duì)糖尿病腎病的治療作用及其可能機(jī)制。
　　 方法：清潔級(jí)雄性SD健康大鼠38只，體重200±10g，普通飼料適應(yīng)性喂養(yǎng)1周后，分別置代謝籠里取尿，測(cè)定尿蛋白及尿紅細(xì)胞全部陰性，隨機(jī)分為4組，正常組（C，n=8只）、模型組（D，n=

5、10只）、貝那普利組（D1，n=10只）、糖腎飲組（D2，n=10只）。正常組除外，其余3組大鼠給予一次性腹腔注射鏈脲佐菌素（STZ）60mg/kg，正常組注射相應(yīng)量生理鹽水，72小時(shí)后尾靜脈采血，用血糖儀測(cè)定隨機(jī)血糖，以血糖≥16.7mmol/L為DM模型成模標(biāo)準(zhǔn)。成模一周后，各治療組開(kāi)始按成人劑量的20倍給藥，每日一次。糖腎飲組按30g/kg予糖腎飲灌胃，貝那普利組按10mg/kg予貝那普利灌胃，各組共給藥8周，正常組與模型組均每日

6、灌服相應(yīng)量生理鹽水。實(shí)驗(yàn)期間動(dòng)物均以普通飼料喂養(yǎng)，自由進(jìn)食、飲水。于DM成模第9周末，禁食不禁水用代謝籠收集各組大鼠24小時(shí)尿液，測(cè)定24小時(shí)尿蛋白定量，而后麻醉動(dòng)物，股動(dòng)脈取血，分離血清檢測(cè)各組大鼠糖化血紅蛋白（HbA1C）、膽固醇（TC）和甘油三酯（TG）。無(wú)菌操作取雙腎，去包膜稱(chēng)重，計(jì)算腎臟肥大指數(shù)，光鏡下觀察腎組織病理形態(tài)學(xué)變化，免疫組化法檢測(cè)腎組織PKC-β和TGF-β1的表達(dá)情況，放射免疫法檢測(cè)腎組織AngⅡ表達(dá)情況。全部數(shù)

7、據(jù)采用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)軟件處理，以均數(shù)士標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）表示，組間比較采用單因素方差分析，P<0.05為有顯著性差異。
　　 結(jié)果：
　　 1各組大鼠的一般情況
　　 正常組大鼠飲水情況、精神狀態(tài)、日?；顒?dòng)均正常；模型組表現(xiàn)為明顯消瘦，多飲、多食、多尿明顯，精神萎靡，色澤黯淡，反應(yīng)遲鈍，部分出現(xiàn)肢體、尾部感染潰爛、白內(nèi)障等合并癥。各治療組也有類(lèi)似表現(xiàn)，但程度較模型組減輕。模型組、貝那普利組和糖腎飲組分別死亡2

8、只。死亡原因?yàn)楣辔?、感染、互相撕咬?br>　　 2各組大鼠體重、肥大指數(shù)（腎重/體重）變化
　　 與正常組比較，模型組及兩個(gè)治療組體重明顯下降（P<0.01），與模型組比較，兩個(gè)治療組明顯升高（P<0.05），兩個(gè)治療組之間比較無(wú)顯著性差異（P>0.05）。與正常組比較，模型組及兩個(gè)治療組肥大指數(shù)明顯升高（P<0.05），與模型組比較，兩個(gè)治療組明顯降低（P<0.01），兩個(gè)治療組之間比較無(wú)顯著性差異（P>0.05）。

9、>　　 3各組大鼠糖化血紅蛋白（HbA1C）變化
　　 與正常組比較，模型組及兩個(gè)治療組明顯升高（P<0.01）；而模型組與兩個(gè)治療組三組之間比較，無(wú)顯著性差異（P>0.05）。
　　 4各組大鼠血脂的變化
　　 造模各組甘油三酯（TG）和膽固醇（TC）都明顯高于正常組（P<0.01）；對(duì)于膽固醇，糖腎飲組明顯下降（P<0.05），而貝那普利組與模型組比較無(wú)顯著性差異（P>0.05）；對(duì)于甘油三酯，兩個(gè)治療組與

10、模型組比較明顯降低（P<0.05），兩個(gè)治療組之間比較無(wú)顯著性差異（P>0.05）。
　　 5各組大鼠24h尿蛋白定量的比較
　　 與正常組比較，模型組和兩個(gè)治療組均明顯增多（P<0.01），與模型組比較，兩個(gè)治療組明顯降低（P<0.01），兩個(gè)治療組之間比較無(wú)顯著性差異（P>0.05）。
　　 6腎組織病理形態(tài)學(xué)觀察
　　 行HE、PAS染色后，光鏡下可見(jiàn)正常組腎小球結(jié)構(gòu)完整，未見(jiàn)腎小球肥大及異常改變。

11、模型組腎小球體積增大，腎小球毛細(xì)血管基底膜增厚，系膜細(xì)胞增生，系膜基質(zhì)增多，系膜區(qū)增寬。兩個(gè)治療組都有類(lèi)似病理改變，但較模型組均有不同程度的減輕。
　　 7腎組織AngⅡ含量
　　 與正常組比較，模型組及兩個(gè)治療組明顯增多（P<0.01）；與模型組比較，兩個(gè)治療組均明顯降低（P<0.01），兩個(gè)治療組之間比較無(wú)顯著性差異（P>0.05）。
　　 8腎組織TGF-β1免疫組化結(jié)果
　　 光鏡下觀察，TGF-

12、β1主要表達(dá)于腎小球內(nèi)，腎小管也有少量表達(dá)。正常組在上述部位有微弱表達(dá)，模型組和兩個(gè)治療組的表達(dá)增強(qiáng)。病理圖像半定量分析：與正常組比較，模型組及兩個(gè)治療組表達(dá)明顯增強(qiáng)（P<0.01）；與模型組比較，兩個(gè)治療組的表達(dá)均明顯降低（P<0.01），兩個(gè)治療組之間比較無(wú)顯著性差異（P>0.05）。
　　 9腎組織PKC-β免疫組化結(jié)果
　　 光鏡下觀察，PKC-β主要表達(dá)于腎小管，腎小球內(nèi)表達(dá)極微弱。正常組在上述部位有微弱表達(dá)。

13、模型組和兩個(gè)治療組的表達(dá)增強(qiáng)。病理圖像半定量分析：與正常組比較，模型組及兩個(gè)治療組表達(dá)明顯增強(qiáng)（P<0.01）；與模型組比較，兩個(gè)治療組的表達(dá)均明顯降低（P<0.01），兩個(gè)治療組之間比較無(wú)顯著性差異（P>0.05）。
　　 結(jié)論：
　　 1糖腎飲能夠減少DN大鼠的尿蛋白，調(diào)節(jié)脂代謝。
　　 2糖腎飲能夠改善DN大鼠腎臟病理形態(tài)。
　　 3糖腎飲對(duì)DN大鼠腎臟的保護(hù)作用可能與其降低腎組織AngⅡ、PKC-