深海中產(chǎn)蛋白酶菌株的篩選及酶學(xué)性質(zhì)分析.pdf

1、蛋白酶是工業(yè)上主要用酶之一，廣泛應(yīng)用在食品、化妝品和醫(yī)藥等領(lǐng)域。其中，冷適蛋白酶在食品加工和化妝品應(yīng)用方面有中溫蛋白酶無(wú)法取代的優(yōu)勢(shì)，其最顯著的三大特點(diǎn)為最適溫度一般在10℃-45℃、0-30℃范圍內(nèi)催化效率較高、熱穩(wěn)定性比中溫酶差。本論文從深海沉積物中篩選到一株產(chǎn)蛋白酶菌株，并對(duì)其進(jìn)行菌種鑒定、培養(yǎng)基組成和發(fā)酵條件的優(yōu)化及酶液的酶學(xué)性質(zhì)分析，為冷適酶的開(kāi)發(fā)應(yīng)用提供基礎(chǔ)研究。結(jié)果如下：
　　通過(guò)對(duì)菌株的形態(tài)學(xué)觀察和生理生化指標(biāo)分析

2、，確定該菌株為革蘭氏陽(yáng)性菌株，能夠利用多種糖源發(fā)酵，接觸酶試驗(yàn)和甲基紅試驗(yàn)為陰性，硝酸鹽，精氨酸雙水解酶試驗(yàn)和VP試驗(yàn)為陽(yáng)性。進(jìn)一步對(duì)該菌株的16S rDNA序列比對(duì)，發(fā)現(xiàn)其與Bacillussubtilis strain Acj115有較近的親緣關(guān)系，確定其為枯草芽孢桿菌(Bacillus subtilis)，命名為Bacillus subtilis.N-9。
　　采用單因素試驗(yàn)和正交試驗(yàn)，在搖瓶水平上對(duì)菌株的發(fā)酵培養(yǎng)基組成和發(fā)

3、酵條件進(jìn)行優(yōu)化，得到優(yōu)化后的培養(yǎng)基組成為(g/L):木糖25，蛋白胨35，酵母浸出物16，NaCl10，KH2PO43，K2HPO47;優(yōu)化后的發(fā)酵條件為:pH5.5，裝液量80mL，種齡15h，接種量3.5％，在以上優(yōu)化后的發(fā)酵培養(yǎng)基組成和發(fā)酵條件進(jìn)行發(fā)酵，測(cè)定蛋白酶酶活為306.93U/mL，較優(yōu)化之前提高了223.56％。
　　采用硫酸銨分級(jí)沉淀對(duì)菌株發(fā)酵所產(chǎn)蛋白酶液進(jìn)行初步純化，分析該蛋白酶的酶學(xué)性質(zhì)。作為一種冷適酶，該蛋