甘薯品種徐薯18遺傳轉(zhuǎn)化體系的研究.pdf

1、本研究以甘薯主栽品種徐薯18的胚性懸浮細(xì)胞為受體，研究影響農(nóng)桿菌介導(dǎo)法遺傳轉(zhuǎn)化效率的諸條件，以建立徐薯18的遺傳轉(zhuǎn)化體系。所用菌株為根癌農(nóng)桿菌EHA101，該菌株攜帶的質(zhì)粒pROA93上含有新霉素磷酸轉(zhuǎn)移酶基因(NPTⅡ)和8-葡萄糖苷酸酶基因(GUS)?！　⊥ㄟ^對(duì)菌液濃度、懸浮細(xì)胞繼代培養(yǎng)時(shí)間、甘露醇高滲處理、共培養(yǎng)時(shí)間、共培養(yǎng)培養(yǎng)基中的AgNO3和乙酰丁香酮(AS)濃度、選擇壓等因素的系統(tǒng)研究，確定了徐薯18胚性懸浮細(xì)胞遺傳轉(zhuǎn)化的

2、適宜條件。結(jié)果表明，繼代培養(yǎng)3d的胚性懸浮細(xì)胞最適合轉(zhuǎn)化；菌液濃度OD600nm=0.1～0.9對(duì)遺傳轉(zhuǎn)化效率沒有明顯影響；用0.45mol/L甘露醇預(yù)處理胚性懸浮細(xì)胞60min可以顯著提高轉(zhuǎn)化效率；共培養(yǎng)2-4d，轉(zhuǎn)化效率高，并且轉(zhuǎn)化愈傷組織狀態(tài)好；在共培養(yǎng)培養(yǎng)基中添加20μmol/LAgNO3可以顯著提高轉(zhuǎn)化效率；在共培養(yǎng)培養(yǎng)基中添加100μmol/LAS可以顯著提高轉(zhuǎn)化效率。利用適宜的轉(zhuǎn)化條件轉(zhuǎn)化徐薯18胚性懸浮細(xì)胞，GUS瞬時(shí)表