海洋寡糖抗老年性癡呆藥物971單克隆抗體的制備及其抗原決定簇的確定.pdf

1、基于糖類物質(zhì)缺乏合適的檢測(cè)方法,尤其是缺乏合適的臨床藥代動(dòng)力學(xué)研究方法的難題,該論文利用雜交瘤技術(shù),制備了特異性針對(duì)971的單克隆抗體,計(jì)劃進(jìn)一步用于其體內(nèi)濃度的監(jiān)測(cè).首先是雜交瘤細(xì)胞株的建立,該文利用其結(jié)構(gòu)組成完全相同的母體M來(lái)制備寡糖971的單克隆抗體.通過(guò)還原胺化法與過(guò)碘酸鹽氧化法兩種偶聯(lián)方法的比較,確定了選用還原胺化法制備的M-牛血清白蛋白偶聯(lián)物免疫的Balb/c小鼠進(jìn)行細(xì)胞融合.將免疫小鼠脾細(xì)胞與NS-1小鼠骨髓瘤細(xì)胞系用PE

2、G-4000進(jìn)行融合,以971-卵清蛋白偶聯(lián)物為包被抗原,ELISA法檢測(cè)抗體,篩選陽(yáng)性雜交瘤細(xì)胞;有限稀釋法克勤克隆化三次后,建立了兩株能持續(xù)分泌抗971單克隆抗體的雜交瘤細(xì)胞株,命名為G3C5E8和G4D8E8.在獲得971單克隆抗體雜交瘤細(xì)胞株的基礎(chǔ)上,對(duì)細(xì)胞株及所分泌抗體的特性進(jìn)行了研究.使用流式細(xì)胞儀測(cè)定了雜交瘤DNA含量,證明兩株細(xì)胞均為融合細(xì)胞.經(jīng)試劑盒檢測(cè)得知G3C5E8和G4D8E8抗體亞型均為IgG<,1>,k型.抗

3、971單克隆抗體經(jīng)971阻斷試驗(yàn)及競(jìng)爭(zhēng)性抑制試驗(yàn)證明兩株單克隆抗體對(duì)971具有特異性,而且與內(nèi)源性多糖無(wú)交叉反應(yīng).雜交瘤細(xì)胞系經(jīng)6個(gè)月以上的連續(xù)傳代及反復(fù)凍融3次均能穩(wěn)定分泌抗971單克隆抗體,而且所分泌抗體在37℃保存條件下,三天內(nèi)仍能保持活性.接種雜交瘤至Balb/c小鼠誘發(fā)產(chǎn)生含特異性抗體的腹水.用飽和硫酸銨沉淀法純化腹水中的抗體,并用Protein-G親和柱層析純化G3C5E8抗體,抗體純化過(guò)程中較好的保持了抗體活性.SDS-P