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文檔簡介
1、c-Jun氨基末端激酶(JNK)信號(hào)途徑在細(xì)胞增殖、轉(zhuǎn)化、分化和凋亡等發(fā)育過程中起著重要作用。核仁關(guān)鍵蛋白1(Nep1)基因是酵母核糖體40S小亞基生物發(fā)生所必需,人類Nep1基因的突變會(huì)引發(fā)神經(jīng)退行性疾病。家蠶是重要的經(jīng)濟(jì)昆蟲也是鱗翅目的核心模式昆蟲,家蠶中Jun和Nep1基因的報(bào)道幾乎空白。本研究室前期克隆了家蠶BmJun、BmFos和BmNep1基因,但其生物學(xué)功能仍有許多不明之處。本文運(yùn)用RT-PCR、qRT-PCR、IP、We
2、stern blotting、免疫組織化學(xué)和LC-MS/MS等技術(shù)手段,研究了家蠶JNK途徑中BmJun蛋白與 BmFos蛋白的關(guān)系及其對(duì)家蠶生殖發(fā)育的調(diào)控功能;研究了 BmNep1蛋白在家蠶幼蟲蛻皮與化蛹變態(tài)過程中受蛻皮激素誘導(dǎo)在細(xì)胞核內(nèi)的表達(dá)調(diào)控,探討了其參與核糖體生物發(fā)生的過程及其組織共通性。主要結(jié)果如下:
1家蠶JNK途徑通過調(diào)控BmVg的合成和貯存影響生殖發(fā)育
c-Jun蛋白在哺乳動(dòng)物中既可以形成同源二聚體
3、,也可與Fos蛋白形成異源二聚體AP-1,發(fā)揮轉(zhuǎn)錄因子的調(diào)控作用。果蠅的DJ un和DFos蛋白只形成異源二聚體。本文根據(jù)前期克隆的BmJun與BmFos基因序列,構(gòu)建了pCMV-BmJun-EGFP和 pCMV-BmFos-FLAG重組質(zhì)粒,異源表達(dá)于 HEK293T細(xì)胞系中,提取總蛋白進(jìn)行了IP實(shí)驗(yàn),結(jié)果表明,BmJun與BmFos蛋白存在相互作用,推測(cè)其形成BmAP-1發(fā)揮調(diào)控作用。
本實(shí)驗(yàn)室前期干涉BmJun出現(xiàn)了子代
4、卵發(fā)育不良的結(jié)果?;诩倚Q卵黃蛋白原(BmVg)在幼蟲化蛹變態(tài)期間的脂肪體中合成的生理基礎(chǔ),本文調(diào)查了該時(shí)期BmJun,BmFos與 BmVg基因的表達(dá)模式。在脂肪體組織中,BmVg基因的表達(dá)模式與 BmJun/BmFos基因一致,在預(yù)蛹期顯著上調(diào)表達(dá),進(jìn)一步調(diào)查證實(shí)BmJun蛋白水平在預(yù)蛹期脂肪體中顯著升高。BmJun基因及蛋白在卵巢中的表達(dá)變化趨勢(shì)與脂肪體中變化一致。搖擺期干涉BmJun基因,BmVg基因的表達(dá)量顯著下調(diào)。在搖擺期用
5、JNK激酶的抑制劑SP600125處理家蠶,處理組雌性家蠶的BmVg蛋白在脂肪體和卵巢組織中表達(dá)量降低,蛹期的卵巢生殖腺系數(shù)顯著降低,產(chǎn)出發(fā)育不良卵及異常產(chǎn)卵的成蟲的比例增加,并存在劑量效應(yīng)。表明BmJun/BmFos可能以二聚體B mAP-1參與調(diào)控家蠶B mV g基因在脂肪體組織中的合成,并最終參與卵巢與蠶卵的發(fā)育調(diào)控。
2家蠶BmNep1蛋白受蛻皮激素調(diào)控參與核糖體的生物發(fā)生
Nep1蛋白參與酵母40S核糖體的
6、生物發(fā)生,鼠同系物Nep1可恢復(fù)酵母Nep1突變引發(fā)的功能缺陷,人類Nep1突變引發(fā)BCS疾病。昆蟲中尚無Nep1與核糖體生物發(fā)生相關(guān)的功能研究報(bào)道。我們前期已在絲腺退化過程中發(fā)現(xiàn) BmNep1基因與蛻皮激素初級(jí)響應(yīng)基因BmE74 A的上調(diào)表達(dá)趨勢(shì)一致,并用20E誘導(dǎo)BmN細(xì)胞系中BmNep1的表達(dá)。本文調(diào)查了BmNep1基因與蛋白在家蠶5齡第3天各組織中的表達(dá)譜,發(fā)現(xiàn)其在絲腺組織中特異性高表達(dá),進(jìn)一步調(diào)查4齡幼蟲蛻皮期間與幼蟲化蛹變態(tài)
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