骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞移植對(duì)肺氣腫模型大鼠的治療機(jī)制探討.pdf

1、目的:
　　1.從SD大鼠骨髓中分離間充質(zhì)干細(xì)胞,體外培養(yǎng)和鑒定,為動(dòng)物實(shí)驗(yàn)做準(zhǔn)備;
　　2.利用豬胰蛋白酶一次性氣管內(nèi)滴入SD大鼠建立肺氣腫模型;
　　3.在模型基礎(chǔ)上通過尾靜脈注入骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞,通過觀察骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(BMSCs)對(duì)肺氣腫模型大鼠中炎癥因子、血?dú)夥治龊头谓M織病理學(xué)變化的影響,探討骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞對(duì)肺氣腫的治療作用及肺氣腫的發(fā)病機(jī)制。
　　方法:
　　1.選擇80-100克雄性SD大

2、鼠的股骨,沖洗骨髓腔,收集骨髓細(xì)胞懸液。用DMEM-LG培養(yǎng)液(10％FBS,100u/L青霉素,100u/L鏈霉素)培養(yǎng),接種于塑料培養(yǎng)瓶,置于37℃、5%CO2培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng),倒置相差顯微鏡觀察細(xì)胞生長情況及形態(tài)特征,按1:3傳代培養(yǎng)。取生長狀態(tài)良好的第三代骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞用流式細(xì)胞儀鑒定細(xì)胞表面抗原的表達(dá);
　　2.30只健康雄性SD大鼠,隨機(jī)分成3組:正常對(duì)照組、模型組和治療組。通過豬胰蛋白酶誘導(dǎo)建立COPD模型后,大鼠尾靜

3、脈注射BMSCs進(jìn)行生物治療。14天后處死大鼠,觀察血?dú)夥治?、肺組織病理學(xué)變化以及肺泡灌洗液(BALF)細(xì)胞計(jì)數(shù)與分類;使用ELISA方法檢測(cè)COPD大鼠BALF中IL-1β、TNF-α及 IL-10水平。3.實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)采用SPSS11.5統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行,多組比較方差分析和組間比較用SNK法, P<0.05表示統(tǒng)計(jì)學(xué)上差異有顯著性。
　　結(jié)果:
　　1、各組大鼠動(dòng)脈血?dú)夥治霰容^:PH值,氧分壓、二氧化碳分壓及血氧飽和度組間比較,

4、差異無顯著性意義(P>0.05);
　　2、支氣管肺泡灌洗液(BALF)中細(xì)胞總數(shù)及分類,模型組 BALF中白細(xì)胞總數(shù)、巨噬細(xì)胞數(shù)及中性粒細(xì)胞數(shù)均顯著高于對(duì)照組(P<0.05),經(jīng)BMSC治療后的大鼠BALF中白細(xì)胞總數(shù)、巨噬細(xì)胞數(shù)及中性粒細(xì)胞數(shù)均顯著低于模型組(P<0.05)。
　　3、ELISA結(jié)果顯示BMSCs治療組中 IL-1β、TNF-α水平較正常對(duì)照組顯著升高(P<0.05),但低于模型組(P<0.05);IL-

5、10水平較正常組顯著降低(P<0.05),但高于模型組(P<0.05);
　　4、BMSCs治療組、模型組均可見到肺氣腫樣改變,BMSCs治療組較模型組肺氣腫樣改變減輕,比較肺組織平均內(nèi)襯間隔(MLI)、單位面積平均肺泡數(shù)(MAN)、平均肺泡面積(MAA)差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。
　　結(jié)論:
　　1.本實(shí)驗(yàn)利用全骨髓貼壁法可成功分離純化并擴(kuò)增骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(BMSCs),分離培養(yǎng)所得的細(xì)胞性狀穩(wěn)狀態(tài)良好,