13742.廣西巴馬小型豬tau基因真核表達載體的構(gòu)建及功能驗證

1、分類號UDCS8133碩士學(xué)位論文廣西巴馬小型豬Tall基因真核表達載體的構(gòu)建及功能驗證陳少梅學(xué)科專業(yè)動物遣佳直弛墨繁殖指導(dǎo)教師整獨生砑窒員論文答辯日期2Q13生魚月3目學(xué)位授予日期答辯委員會主席蘭王堡數(shù)握廣西巴馬小型豬Tat基因真核表達載體的構(gòu)建及功能驗證摘要Tau蛋白可促進微管蛋白聚集形成微管并保持其穩(wěn)定性，過度磷酸化時會在神經(jīng)元內(nèi)形成神經(jīng)纖維纏結(jié)，是阿爾茨海默病的標(biāo)志性病變之一。本研究的目的是通過克隆廣西巴馬小型豬Tau基因，構(gòu)建

2、其真核表達載體，并對其功能進行驗證，為廣西巴馬小型豬阿爾茨海默病模型的制作奠定基礎(chǔ)。根據(jù)GenBank中豬的Tau基因預(yù)測序列設(shè)計引物，以廣西巴馬小型豬腦組織總RNA進行RTPCR，獲得的序列與參考序列相比缺少1134bp。應(yīng)用巢式PCR和5RACE進行缺失片段的驗證，發(fā)現(xiàn)一處編碼區(qū)缺失(3441389bp)和兩處選擇性剪接(191~277bp、1526d1579bp)，由此構(gòu)成了四個可變剪接體。將4個序列提交至GenBank中，獲得四

3、個登錄號KC473498、KC473499、KC473500、KC473501。參考人的PDGFB基因轉(zhuǎn)錄起始位點上游序列設(shè)計兩對引物，用于擴增PDGFB基因的啟動子，獲得PDGF—I)305和PDGF—p1501兩段長度不同的序列，并克隆至保留啟動子的pEGFPN1和不含啟動子的pEGFP一1載體中。神經(jīng)細胞PCI2的轉(zhuǎn)染實驗結(jié)果表明PDGF—p305和PDGF—p1501片段均具有啟動子功能，PDGF—p305的啟動能力強于PDGF