檉柳eIF1A基因植物表達(dá)載體的構(gòu)建及功能驗(yàn)證.pdf

1、本研究是將從抗旱、耐鹽植物檉柳(Tamarix.sp)中克隆得到的eIF1A基因構(gòu)建到植物表達(dá)載體pROKⅡ上，采用根癌農(nóng)桿菌介導(dǎo)法進(jìn)行煙草的遺傳轉(zhuǎn)化，獲得了89株卡那霉素抗性芽，對(duì)生長(zhǎng)較優(yōu)的7個(gè)轉(zhuǎn)化株系進(jìn)行PCR檢測(cè)和PCR-Southern印跡雜交，結(jié)果全部為陽性，通過RT-PCR和實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)，證實(shí)eIF1A基因整合到煙草基因組中并得到表達(dá)。各轉(zhuǎn)基因煙草中eIF1A基因相對(duì)于內(nèi)標(biāo)基因GAPDH(甘油醛-3-磷酸-脫氫酶)

2、的表達(dá)量不同，是內(nèi)標(biāo)基因GAPDH的14.61倍～290.42倍。 (1)對(duì)各轉(zhuǎn)基因煙草T0代分別進(jìn)行了鹽脅迫和干旱脅迫處理。分析了T0代轉(zhuǎn)基因煙草的耐鹽抗旱能力，結(jié)果顯示：在NaC1濃度為240mmol/L時(shí)，各轉(zhuǎn)基因煙草組培苗大部分生長(zhǎng)良好，生根率在50％以上，鹽害指數(shù)均低于57.5％，而T0代非轉(zhuǎn)基因煙草對(duì)照不能生根，鹽害指數(shù)高達(dá)67.7％。結(jié)果表明，轉(zhuǎn)eIF1A基因煙草的耐鹽性得到明顯提高。在不同濃度NaCl脅迫下，轉(zhuǎn)基

3、因株系的增重均高于非轉(zhuǎn)基因煙草對(duì)照，隨著NaCl濃度的增加，非轉(zhuǎn)基因煙草對(duì)照的生長(zhǎng)明顯減弱，而轉(zhuǎn)基因煙草重量增加明顯高于對(duì)照。分析了不同濃度NaCl對(duì)煙草細(xì)胞膜系統(tǒng)的影響，結(jié)果顯示，各轉(zhuǎn)基因植株的相對(duì)電導(dǎo)率、MDA含量均低于非轉(zhuǎn)基因煙草對(duì)照，說明各轉(zhuǎn)基因煙草細(xì)胞膜受到鹽脅迫的傷害較小。不同濃度NaCl脅迫下SOD活性測(cè)定顯示，各轉(zhuǎn)基因煙草和非轉(zhuǎn)基因?qū)φ盏腟OD活性是隨著鹽濃度的升高而升高，但各轉(zhuǎn)基因煙草SOD活性增幅明顯高于非轉(zhuǎn)基因煙草

4、對(duì)照。 對(duì)轉(zhuǎn)基因煙草T0代盆栽苗分別進(jìn)行干旱脅迫試驗(yàn)顯示：在20d干旱脅迫條件下，非轉(zhuǎn)基因煙草對(duì)照的旱害指數(shù)達(dá)到52.27％，轉(zhuǎn)基因株系的旱害指數(shù)僅達(dá)到30.56％～46.67％。對(duì)旱脅迫10d、20d的相對(duì)電導(dǎo)率測(cè)定表明，各轉(zhuǎn)基因煙草和非轉(zhuǎn)基因?qū)φ諢煵輰?duì)電導(dǎo)率都有升高的趨勢(shì)，但各轉(zhuǎn)基因煙草的增幅較??；對(duì)SOD活性和可溶性蛋白含量測(cè)定表明，各轉(zhuǎn)基因煙草和對(duì)照煙草均是隨著旱脅迫時(shí)間的延長(zhǎng)而升高。 (2)對(duì)各轉(zhuǎn)基因煙草T1代