48289.人hssad1基因的克隆和特征分析暨h(yuǎn)ssad1蛋白激酶功能為1433所調(diào)節(jié)的機(jī)制研究

1、復(fù)旦大學(xué)博士學(xué)位論文人HsSAD1基因的克隆和特征分析暨HsSAD1蛋白激酶功能為1433所調(diào)節(jié)的機(jī)制研究姓名：葉光明申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：博士專業(yè)：遺傳學(xué)指導(dǎo)教師：談家楨余龍20051030復(fù)旦大學(xué)博士論文中文搬p““and1433B“叩，驗(yàn)證了突變了的14_33蛋白不能與HsSADI互作；另一方面發(fā)現(xiàn)用^PPase磷脂酶去除了磷酸化的HsSADI也失去和GSTl4—3—3B互作的能力。我們發(fā)現(xiàn)激酶的活性喪失后則兩者的相互作用消失，同時(shí)又發(fā)現(xiàn)

2、HsSADI激酶具有自身磷酸化的特性。這些結(jié)果提示HsSADl的自身磷酸化產(chǎn)生了14—3—3蛋白的結(jié)合位點(diǎn)。為了確定HsSADl與14—33B的作用區(qū)域，我們將HsSADI蛋白從c端進(jìn)行缺失突變體的構(gòu)建。通過互作實(shí)驗(yàn)將HsSADI與1433的互作區(qū)域局限于HsSADI蛋白的349500位氨基酸。最后我們調(diào)查了1433蛋白與HsSADI的互作對(duì)HsSADI的功能影響。我們發(fā)現(xiàn)細(xì)胞中1433i3的過量表達(dá)可以抑制HsSADI的激酶活性；重組

3、表達(dá)的1433B蛋白也能抑制HsSADI的激酶活性。這些結(jié)果表明1433蛋白不但是激酶HsSADI的互作蛋白，同時(shí)也是HsSADI活性調(diào)節(jié)蛋白。在細(xì)胞周期試驗(yàn)中，我們發(fā)現(xiàn)1433B蛋白能部分減弱HsSADI誘導(dǎo)的G2／M期的阻滯。該結(jié)果進(jìn)一步說明了1433蛋白是HsSADI功能作用的重要調(diào)節(jié)蛋白。另外，我們報(bào)道了一個(gè)新的人類1J旨酰甘油3磷酸一?；D(zhuǎn)移酶基因AGPAI“7的克隆與特征。卜脂酰甘油一3～磷酸一酰基轉(zhuǎn)移酶是真核生物甘油酯類的

4、生物合成中的一個(gè)關(guān)鍵酶。迄今為止，在人的卜?；视?磷酸一酰基轉(zhuǎn)移酶家族中已經(jīng)報(bào)道了6個(gè)成員，分別命名為APGATl6。我們發(fā)現(xiàn)的AGPA77基因定位于染色體15q24區(qū)段。該基因編碼524個(gè)氨基酸；在123234氨基酸處有一個(gè)?；D(zhuǎn)移酶結(jié)構(gòu)域。人18種組織中的表達(dá)譜分析顯示，AGPAT7在子宮，胸腺，胰腺，骨骼肌，膀胱。胃，肺和睪丸組織中有廣泛表達(dá)。Hela細(xì)胞的亞細(xì)胞定位結(jié)果顯示該?；D(zhuǎn)移酶主要定位于細(xì)胞內(nèi)質(zhì)網(wǎng)上。關(guān)鍵詞：HsSAD