MicroRNA-432影響成肌細胞增殖及期通過靶向MYOZ1基因影響肌纖維類型標(biāo)記基因的表達.pdf

1、MYOZ1基因在肌小節(jié)組裝和不同類型肌纖維形成等過程中起到廣泛的調(diào)控作用，MYOZ1的功能涉及骨骼肌快肌和慢肌的形成及比例。因其編碼的蛋白在肌纖維Z線形成及快肌纖維相關(guān)生理過程中起關(guān)鍵作用而被廣泛關(guān)注。該基因在骨骼肌生長發(fā)育、肌纖維類型調(diào)控以及動物的體型和肉質(zhì)研究方面均具有重要研究價值，尋找影響MYOZ1基因表達的調(diào)控因子對改善家畜的肉質(zhì)和體型方面有重要意義。本實驗室利用芯片結(jié)果結(jié)合表達譜分析，初步確定miR-432和MYOZ1的靶向關(guān)

2、系，通過研究靶向MYOZ1的miR-432及其在肌纖維類型變化中的調(diào)節(jié)作用，為探究miRNA調(diào)控骨骼肌生長發(fā)育及肌肉類型的分子機理奠定基礎(chǔ)。取得的主要結(jié)果如下:
　　 (1)運用定量Q-PCR進行MYOZ1基因的組織表達情況檢測，在大白豬的心、肝、脾、肺、腎、小腸、骨骼肌和脂肪等組織中，該基因在骨骼肌中表達量最高而在其他組織中表達量較少。此外在豬胚胎期33天，65天和成年的骨骼肌中檢測MYOZ1的表達量發(fā)現(xiàn)該基因的表達隨著豬從胚

3、胎期到成年呈上調(diào)表達。
　　 (2)定量檢測miR-432和MYOZ在C2C12細胞分化0天、1天、2天、4天和6天五個時期的表達量，發(fā)現(xiàn)miR-432隨著細胞的分化呈顯著的下調(diào)，而MYOZ1基因表達隨著細胞的分化呈顯著上調(diào)。
　　 (3)通過細胞中檢測雙熒光素活性，初步證明miR-432和MYOZ1的靶向互做關(guān)系。通過Western Blot免疫印跡實驗和免疫熒光實驗檢測MYOZ1蛋白表達水平可被miR-432下調(diào)，進

4、一步說明MYOZ1是miR-432的靶基因。
　　 (4)利用xCELLigence實時監(jiān)測系統(tǒng)分析miR-432在C2C12細胞增殖中的作用時發(fā)現(xiàn)，講內(nèi)源表達的miR-432抑制后的C2C12細胞的增殖作用明顯小于對照組細胞，說明抑制了miR-432后細胞的增殖速度下降，miR-432影響肌細胞增殖。
　　 (5) C2C12細胞中過表達miR-432后分別分化培養(yǎng)1、3、5天，收集細胞總RNA通過Q-PCR技術(shù)檢測快

5、肌maker MYH4和慢肌maker MYH7的表達情況，結(jié)果表明過表達miR-432后慢肌maker表達量上升較快，說明miR-432可以促進慢肌的形成。通過在C2C12中過表達MYOZ1和抑制miR-432提高MYOZ1表達水平后再分別分化1、2、4天，檢測快慢肌maker的表達情況，結(jié)果表明過表達MYOZ1和抑制細胞中本底的miR-432后，快肌makerMYH4的表達量上升較快，說明過量表達的MYOZ1和低量的miR-432導(dǎo)