中國(guó)明對(duì)蝦(Fenneropenaeus chinensis)卵巢及肝胰腺消減文庫(kù)的構(gòu)建及分析.pdf

1、中國(guó)明對(duì)蝦,是我國(guó)重要的海水養(yǎng)殖種類,屬節(jié)肢動(dòng)物門、甲殼綱、十足目、對(duì)蝦科、明對(duì)蝦屬。本研究中通過(guò)外部觀察、性腺指數(shù)以及石蠟切片的方法并參照前人研究將中國(guó)明對(duì)蝦的卵巢發(fā)育分為卵原細(xì)胞增殖期、卵黃發(fā)生前期、初級(jí)卵黃發(fā)生期、次級(jí)卵黃發(fā)生期和消退期等五個(gè)時(shí)期。然后利用抑制性消減雜交技術(shù)(SSH)分別構(gòu)建卵原細(xì)胞增殖期和初級(jí)卵黃發(fā)生期的卵巢和肝胰腺的正反向消減文庫(kù)以及卵黃發(fā)生前期和消退期卵巢和肝胰腺的正反向消減文庫(kù),測(cè)序結(jié)果與GenBank進(jìn)行

2、BLASTx同源比較,并利用GO分析進(jìn)行功能注釋,最后選取部分差異表達(dá)的基因進(jìn)行熒光定量 PCR技術(shù),研究差異表達(dá)的基因在卵巢各個(gè)不同發(fā)育時(shí)期的表達(dá)水平及變化,分析這些基因的表達(dá)特性與功能之間的關(guān)系,以及與卵巢發(fā)育之間的關(guān)系。
　　消減結(jié)果顯示,各文庫(kù)中的差異表達(dá)基因與該文庫(kù)的卵巢發(fā)育時(shí)期相互吻合。卵原細(xì)胞增殖期的卵巢消減文庫(kù)中篩選到的基因主要參與細(xì)胞進(jìn)程,尤其是與細(xì)胞增殖分化(有絲分裂)相關(guān)。卵黃發(fā)生前期、初級(jí)卵黃發(fā)生期和消退期

3、篩選到的基因主要是參與蛋白合成、能量代謝及信號(hào)傳導(dǎo)等基因,推測(cè)這些基因可能在卵黃發(fā)生和皮質(zhì)棒的形成等過(guò)程中有重要作用。
　　利用熒光定量 PCR分別檢測(cè)了 peritrophin mRNA、cytochrome oxidase I mRNA、polehole-like protein mRNA和vitellogenin mRNA等差異表達(dá)的基因在卵巢各不同發(fā)育時(shí)期的表達(dá)水平及變化。這些基因表達(dá)量在初級(jí)卵黃發(fā)生期都是最高的。其中po