人源福氏志賀菌對(duì)雛雞的致病性及雞腸組織β1基因表達(dá)特性研究.pdf

1、志賀菌為革蘭氏陰性病原菌，已被證明是引起人細(xì)菌性痢疾的病原。志賀氏菌可分為福氏志賀菌，鮑氏志賀菌，宋內(nèi)志賀菌和痢疾志賀菌四個(gè)群。由福氏志賀菌引起的細(xì)菌性痢疾主要流行在大多數(shù)發(fā)展中國(guó)家，而且引起的死亡率超過(guò)任何其他志賀菌。人源福氏志賀菌侵襲人的結(jié)腸黏膜后在腸上皮細(xì)胞內(nèi)寄居，同時(shí)引起強(qiáng)烈的炎癥反應(yīng)，導(dǎo)致結(jié)腸黏膜破壞，并最終引發(fā)細(xì)菌性痢疾。2004年，許蘭菊、王川慶等首次發(fā)現(xiàn)志賀菌感染雞的病例，這一發(fā)現(xiàn)對(duì)公共衛(wèi)生意義重大。志賀菌感染雞的侵襲機(jī)

2、制的研究國(guó)內(nèi)外還沒(méi)有，而且禽類和哺乳動(dòng)物在組織結(jié)構(gòu)、體內(nèi)環(huán)境等有很大差異。為此，本文針對(duì)人源福氏志賀菌對(duì)SPF雞的感染力、侵襲動(dòng)態(tài)過(guò)程以及相關(guān)受體進(jìn)行初步研究，旨在闡明人源志賀菌對(duì)雞感染的機(jī)制，為進(jìn)一步揭示志賀菌的致病機(jī)理和理解宿主譜擴(kuò)大的機(jī)制有重要意義。
　　 為確定人源福氏志賀菌在實(shí)驗(yàn)室環(huán)境下對(duì)雛雞的致病力。選取一株分離自人的福氏志賀菌作為感染菌，在實(shí)驗(yàn)室環(huán)境下對(duì)3日齡無(wú)特殊病原(SPF)雞以嗉囊注射和腹腔注射兩種方式分別感

3、染，觀察臨床癥狀及剖檢病變，并在攻毒一周后采集主要組織樣品進(jìn)行病理組織切片觀察。結(jié)果顯示腸道明顯充血、腫脹，光鏡下發(fā)病動(dòng)物腸黏膜有明顯的病理變化，表現(xiàn)為水腫、充血；感染途徑不同，病變程度有所差異，腹腔注射組較嗉囊注射組嚴(yán)重。心臟、肝臟等組織的結(jié)構(gòu)大致完整，病理改變不明顯。由此得出結(jié)論：人源福氏志賀菌對(duì)SPF雛雞有致病性，主要感染雛雞的腸組織，對(duì)其他主要組織也有一定程度的影響。
　　 為進(jìn)一步研究人源福氏志賀菌對(duì)雛雞的侵襲特性，對(duì)

4、3日齡SPF雞進(jìn)行腸袢攻毒試驗(yàn)，分別于攻毒后2h、6h、12h取出試驗(yàn)雞整段腸組織，進(jìn)行免疫組化和電鏡觀察。免疫組化觀察可知：空腸利回腸段上皮細(xì)胞內(nèi)觀察到志賀菌體的存在，十二指腸、盲腸和直腸則未檢測(cè)到；電鏡結(jié)果顯示，在空腸回腸段上皮細(xì)胞內(nèi)觀察到菌體，與免疫組化結(jié)果一致。以上試驗(yàn)可知，人源福氏志賀菌能侵襲雛雞腸上皮細(xì)胞，侵襲部位主要集中在空腸和回腸。
　　 為鑒定β1整合素在雛雞腸組織中時(shí)空表達(dá)特點(diǎn)，設(shè)計(jì)一對(duì)引物，建立反轉(zhuǎn)錄PCR

5、方法對(duì)β1mRNA進(jìn)行鑒定，在鑒定完成的β1基因序列上選取保守區(qū)域設(shè)計(jì)一對(duì)定量PCR引物，同時(shí)選取GAPDH基因?yàn)閮?nèi)參，將β1和內(nèi)參擴(kuò)增產(chǎn)物與PMD18-T載體連接，構(gòu)建重組質(zhì)粒作為定量檢測(cè)的標(biāo)準(zhǔn)品，建立檢測(cè)雞β1mRNA表達(dá)水平的SYBRGreenI實(shí)時(shí)熒光定量(Q-PCR)方法，并采用該方法對(duì)1-20日齡商品雞腸組織不同部位中β1mRNA表達(dá)水平進(jìn)行檢測(cè)。結(jié)果顯示不同日齡不同腸段β1mRNA相對(duì)表達(dá)量具有差異，十二指腸和盲腸組織中β