版權(quán)說明:本文檔由用戶提供并上傳,收益歸屬內(nèi)容提供方,若內(nèi)容存在侵權(quán),請進(jìn)行舉報(bào)或認(rèn)領(lǐng)
文檔簡介
1、凋亡(Apoptosis)是一個(gè)生理性的由基因調(diào)控的高度保守的死亡過程,它在維持機(jī)體內(nèi)環(huán)境的穩(wěn)定和防御外在傷害等方面起著重要作用。細(xì)胞凋亡對機(jī)體的生長、發(fā)育及維持正常生理功能都有著重要意義。在昆蟲細(xì)胞中,對凋亡調(diào)控機(jī)制的研究近些年雖取得了一些進(jìn)展,但無論從深度或廣度來說都還遠(yuǎn)遠(yuǎn)不夠,這還需要不斷探索與研究。家蠶作為鱗翅目昆蟲的代表,同時(shí)也作為一種經(jīng)濟(jì)昆蟲,其研究應(yīng)用價(jià)值逐漸提高。家蠶是一種完全變態(tài)的昆蟲,在其每次變態(tài)和蛻皮生長發(fā)育過程中
2、細(xì)胞凋亡起到至關(guān)重要的作用,細(xì)胞凋亡的正常調(diào)控成為了其正常發(fā)育機(jī)制的基礎(chǔ)。然而,家蠶凋亡機(jī)制的研究目前尚處于初級探索階段,如何著手深入探究和揭示家蠶細(xì)胞凋亡的基本機(jī)制成為現(xiàn)階段迫切需要解決的問題。
細(xì)胞凋亡途徑主要有三種通路:線粒體通路、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)通路和死亡受體通路,而且各種通路之間相互聯(lián)系,共同介導(dǎo)細(xì)胞凋亡,其中線粒體通路起到?jīng)Q定性作用。因此,研究線粒體通路是了解凋亡調(diào)控機(jī)制的關(guān)鍵。在線粒體凋亡途徑中,Bcl-2蛋白家族行使著重
3、要的功能,它們之間相互作用或與其它蛋白相互作用,共同對線粒體通路進(jìn)行調(diào)控。在家蠶中,Bmbuffy是目前已鑒定的Bcl-2家族同源基因,但其具體功能還完全未知。鑒于此,本文對Bmbuffy基因在線粒體內(nèi)源性凋亡途徑中的功能進(jìn)行了研究。
作為Ⅱ型程序性細(xì)胞死亡方式,細(xì)胞自噬在機(jī)體生長發(fā)育、清除自身多余物質(zhì)完成代謝更新、抵抗外界壓力及有害微生物侵襲,以及維持內(nèi)環(huán)境穩(wěn)定性方面具有重要作用。近些年,細(xì)胞自噬已成為研究熱點(diǎn)。自噬與凋亡之
4、間既相互獨(dú)立又相互聯(lián)系:一方面,自噬可先于凋亡發(fā)生,并向凋亡轉(zhuǎn)換;另一方面,自噬可抑制凋亡,維持細(xì)胞存活。自噬過程涉及到許多相關(guān)分子的參與,其中,與凋亡相關(guān)的Bcl-2蛋白家族也在自噬過程中發(fā)揮作用。Bmbuffy作為Bcl-2家族的同源基因,是否在家蠶細(xì)胞自噬過程中發(fā)揮作用,這成為本文的另一研究重點(diǎn)。本文所得研究結(jié)果如下:
1.羥基喜樹堿(HCPT)介導(dǎo)家蠶BmN-SWU1細(xì)胞線粒體凋亡通路研究
HCPT處理細(xì)胞一
5、定時(shí)間后,細(xì)胞核呈現(xiàn)了凋亡特征、核內(nèi)DNA發(fā)生片段化、細(xì)胞活力逐漸降低、細(xì)胞凋亡率升高,由此證明HCPT能夠誘導(dǎo)家蠶BmN-SWU1細(xì)胞凋亡。接著本研究對HCPT引起家蠶細(xì)胞凋亡的內(nèi)源性通路進(jìn)行了探討。通過檢測線粒體分布及線粒體膜電位變化、細(xì)胞色素c的釋放,發(fā)現(xiàn)HCPT能使線粒體的分布從均勻集中變?yōu)榱鑱y散在,并導(dǎo)致線粒體膜電位的下降及細(xì)胞色素c的釋放。利用環(huán)孢菌素A(CsA)及Bax五肽抑制劑(Bip-V5)處理細(xì)胞后,發(fā)現(xiàn)細(xì)胞色素c的
6、釋放與細(xì)胞凋亡率受到抑制,表明細(xì)胞色素c的釋放依賴于通透性轉(zhuǎn)換孔(MPTP)的打開及線粒體外膜通透性(MOMP)的增加。通過檢測Caspase酶活性變化,發(fā)現(xiàn)HCPT能促進(jìn)Caspase-9與-3的活性,當(dāng)加入Apaf-1抑制劑后,Caspase-3的活性受到抑制,由此表明,Pro-Caspase-3活性的激活依賴于凋亡復(fù)合體的形成。據(jù)此得出結(jié)論:HCPT通過內(nèi)源性線粒體凋亡途徑誘導(dǎo)家蠶細(xì)胞凋亡。
2.Bmbuffy基因在家蠶
7、細(xì)胞內(nèi)源性線粒體凋亡途徑中的功能研究
對Bmbuffy在家蠶細(xì)胞中的定位研究發(fā)現(xiàn):Bmbuffy定位于線粒體與內(nèi)質(zhì)網(wǎng)外膜上,而缺失掉C末端疏水結(jié)構(gòu)域的Bmbuffy-△TM則散在分布于細(xì)胞質(zhì)與核中,表明C末端疏水結(jié)構(gòu)域能將Bmbuffy錨定在線粒體與內(nèi)質(zhì)網(wǎng)外膜上。檢測Bmbuffy基因?qū)倚Q細(xì)胞凋亡的影響,結(jié)果顯示:在HCPT誘導(dǎo)的家蠶細(xì)胞中,過表達(dá)Bmbuffy基因能抑制細(xì)胞色素c的釋放、Caspase-3酶活性及細(xì)胞凋亡率
8、,同時(shí)對細(xì)胞增殖活力具有促進(jìn)作用,表明Bmbuffy對家蠶細(xì)胞凋亡具有抑制作用,而缺失掉C末端疏水結(jié)構(gòu)域的Bmbuffy卻沒有此功能,表明Bmbuffy的C末端跨膜疏水結(jié)構(gòu)域?qū)ζ涔δ艿男惺咕哂兄匾饔谩_M(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn):當(dāng)HCPT誘導(dǎo)家蠶細(xì)胞后,Bmp53從核內(nèi)逐漸轉(zhuǎn)位到線粒體上,與位于線粒體外膜上的Bmbuffy相互作用,抑制Bmbuffy的抑凋亡功能,從而促進(jìn)細(xì)胞凋亡。過表達(dá)Bmbuffy基因能抑制Bmp53基因的促凋亡效應(yīng),說明Bm
9、buffy與Bmp53之間存在相互拮抗的關(guān)系。
3.Bmbuffy基因在家蠶細(xì)胞自噬中的功能研究
用昆蟲細(xì)胞平衡緩沖液(IBSS)處理BmN-SWU1細(xì)胞一定時(shí)間后,通過MDA染色發(fā)現(xiàn),細(xì)胞出現(xiàn)了自噬現(xiàn)象,表明經(jīng)IBSS處理的細(xì)胞受到了饑餓誘導(dǎo),從而發(fā)生自噬。過表達(dá)Bmbuffy基因能夠抑制IBSS介導(dǎo)的細(xì)胞自噬,說明Bmbuffy對家蠶細(xì)胞自噬具有抑制作用。通過研究Bmbuffy與BmAtg6相互作用發(fā)現(xiàn):正常細(xì)胞
10、中,Bmbuffy與BmAtg6相互作用,抑制自噬的發(fā)生;當(dāng)細(xì)胞發(fā)生自噬時(shí),Bmbuffy與BmAtg6相互解離。經(jīng)定點(diǎn)突變實(shí)驗(yàn)證明:Bmbuffy通過BH結(jié)構(gòu)域與BmAtg6相互作用,且位于其145位的苯丙氨酸(F)在Bmbuffy與BmAtg6相互結(jié)合中起關(guān)鍵作用。通過構(gòu)建PIZ-Bmbuffy-ActA-TM-dsRed與PIZ-Bmbuffy-cb5-TM-dsRed載體,將Bmbuffy分別定向錨定在線粒體外膜與內(nèi)質(zhì)網(wǎng)外膜上,
溫馨提示
- 1. 本站所有資源如無特殊說明,都需要本地電腦安裝OFFICE2007和PDF閱讀器。圖紙軟件為CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.壓縮文件請下載最新的WinRAR軟件解壓。
- 2. 本站的文檔不包含任何第三方提供的附件圖紙等,如果需要附件,請聯(lián)系上傳者。文件的所有權(quán)益歸上傳用戶所有。
- 3. 本站RAR壓縮包中若帶圖紙,網(wǎng)頁內(nèi)容里面會(huì)有圖紙預(yù)覽,若沒有圖紙預(yù)覽就沒有圖紙。
- 4. 未經(jīng)權(quán)益所有人同意不得將文件中的內(nèi)容挪作商業(yè)或盈利用途。
- 5. 眾賞文庫僅提供信息存儲空間,僅對用戶上傳內(nèi)容的表現(xiàn)方式做保護(hù)處理,對用戶上傳分享的文檔內(nèi)容本身不做任何修改或編輯,并不能對任何下載內(nèi)容負(fù)責(zé)。
- 6. 下載文件中如有侵權(quán)或不適當(dāng)內(nèi)容,請與我們聯(lián)系,我們立即糾正。
- 7. 本站不保證下載資源的準(zhǔn)確性、安全性和完整性, 同時(shí)也不承擔(dān)用戶因使用這些下載資源對自己和他人造成任何形式的傷害或損失。
最新文檔
- 家蠶Bme細(xì)胞自噬與凋亡關(guān)系初步研究.pdf
- 活性氧誘導(dǎo)家蠶細(xì)胞凋亡的內(nèi)源性線粒體途徑的研究.pdf
- 大豆疫霉細(xì)胞自噬基因PsAtg6a和細(xì)胞凋亡相關(guān)基因的功能研究.pdf
- Miga促進(jìn)線粒體融合與調(diào)節(jié)細(xì)胞自噬的功能研究.pdf
- 家蠶細(xì)胞凋亡相關(guān)基因BmIce的功能鑒定.pdf
- 烏司他丁對心肺復(fù)蘇后大鼠腦細(xì)胞線粒體途徑凋亡與自噬的影響.pdf
- 自噬在巨噬細(xì)胞清除凋亡細(xì)胞中的作用.pdf
- 細(xì)胞自噬蛋白CUP--5與EPG--5在細(xì)胞自噬過程與細(xì)胞內(nèi)吞過程中的作用.pdf
- 20670.激素和饑餓誘導(dǎo)家蠶細(xì)胞自噬和凋亡的初步研究
- 線粒體鈣單向轉(zhuǎn)運(yùn)體對神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞自噬和線粒體自噬的作用.pdf
- 肝星狀細(xì)胞自噬水平與細(xì)胞增殖、凋亡水平的相關(guān)性研究.pdf
- 脂肪基質(zhì)細(xì)胞誘導(dǎo)分化為星形膠質(zhì)細(xì)胞過程中線粒體凋亡與自噬的關(guān)系.pdf
- 細(xì)胞凋亡與自噬在肝細(xì)胞癌侵襲及轉(zhuǎn)移中的作用研究.pdf
- 家蠶細(xì)胞凋亡抑制因子BmAPI5基因克隆與功能研究.pdf
- 微管作用化療藥物誘導(dǎo)胃癌細(xì)胞自噬-自噬性細(xì)胞死亡及其與胃癌細(xì)胞凋亡敏感性的關(guān)系.pdf
- 羊肉成熟過程中細(xì)胞自噬對細(xì)胞凋亡的影響機(jī)制.pdf
- AMPK在線粒體中的分布及線粒體中AMPKα1對細(xì)胞自噬的影響.pdf
- TIGAR對鼻咽癌細(xì)胞自噬、凋亡及線粒體降解作用研究.pdf
- 家蠶細(xì)胞及絲腺退化和凋亡的程序性細(xì)胞信號通路中 BmDredd基因的功能.pdf
- 線粒體凋亡途徑參與褪黑素誘導(dǎo)胃癌細(xì)胞凋亡.pdf
評論
0/150
提交評論