朱砂葉螨鈉通道基因克隆及其kdr突變研究.pdf

1、朱砂葉螨(Tetranychus cinnabarinus)是一種為害嚴重而又難以防治的重要農業(yè)害螨，該螨世代周期短，繁殖力強，近親交配率高，受藥機會多，很容易產生抗藥性。
　　 昆蟲(螨)抗藥性是由于殺蟲劑表皮穿透性降低、解毒酶活性的增強和靶標系統(tǒng)的不敏感性而引起。電壓門控鈉離子通道是DDT和擬除蟲菊酯類殺蟲劑的作用靶標，這兩類殺蟲劑主要通過改變昆蟲神經膜上鈉離子通道功能而起殺蟲作用。昆蟲則通過改變其鈉離子通道結構，降低對藥劑

2、的敏感性來產生對DDT和擬除蟲菊酯類殺蟲劑的抗藥性。
　　 本文在室內選育朱砂葉螨敏感品系和甲氰菊酯抗性品系的基礎上，監(jiān)測了該螨不同地理種群對甲氰菊酯的抗性水平，建立了朱砂葉螨實驗種群生命表，克隆并比較了敏感和甲氰菊酯抗性品系鈉通道基因cDNA序列，解析了敏感和抗性品系鈉通道基因mRNA的表達模式。獲得如下主要結果：
　　 1.藥膜法生物測定結果表明，與敏感品系相比，朱砂葉螨室內抗性篩選品系對甲氰菊酯的抗性達98.5倍，

3、重慶、浙江、湖北和云南地理種群的抗性水平分別為7.6、9.3、11.8和16.2倍；三種增效劑聯(lián)合(增效劑：甲氰菊酯=3:1和9:1)可抑制室內抗性品系約50-85％的抗性。
　　 2.實驗種群生態(tài)學研究結果表明，與敏感品系相比，室內抗性品系存在生殖不利性，同時發(fā)育速率加快，平均世代歷期縮短。
　　 3.通過RT-PCR及RACE技術，克隆獲得敏感和甲氰菊酯抗性品系鈉通道基因(GenBank登錄號分別為：GU196305

4、和GU569881)，cDNA全長5664bp，編碼1888個氨基酸，包括結構域Ⅰ S1-IVS6；兩條基因都含有可變剪切SV1和SV2；從室內抗性品系堅定一個點突變(F1538I)，該點突變以不同頻率存在室內抗性品系和不同地理種群中，但在敏感品系中的頻率為0，表明該突變是朱砂葉螨的kdr突變。
　　 4.通過Q-PCR，解析了敏感和抗性品系鈉通道基因mRNA的表達模式，結果顯示兩個抗性品系(阿維菌素抗性品系設為對照)鈉通道基因