茯苓原生質(zhì)體融合育種及其發(fā)酵動力學(xué)研究.pdf

1、茯苓隸屬于真菌門，是一種藥食兩用菌。茯苓多糖是茯苓中一類具有廣泛生理活性的物質(zhì)，具有較高的開發(fā)價值及良好的應(yīng)用前景。
　　 為了得到優(yōu)良的菌株，提高菌株的多糖產(chǎn)量，提高發(fā)酵效率，我們對原菌株HD09-10進(jìn)行了原生質(zhì)體融合育種和子實(shí)體培養(yǎng)的研究。并用液體發(fā)酵法培養(yǎng)茯苓菌絲體，從中提取茯苓多糖，研究其液體發(fā)酵的條件和規(guī)律。
　　 通過單因素試驗(yàn)，對原生質(zhì)體制備的培養(yǎng)時間、酶解濃度、酶解溫度、酶解時間、酶解pH、穩(wěn)滲劑等條件

2、進(jìn)行了研究。通過正交實(shí)驗(yàn)，得出其原生質(zhì)體制備及再生的最適宜條件：菌齡為二級液體培養(yǎng)4天，酶濃度3 ％（其中蝸牛酶與溶壁酶的比例為2:1），酶解溫度36 ℃，酶解時間2.5 h，酶解pH6.5，穩(wěn)滲劑0.6 mol/L。通過原生質(zhì)體融合篩選得到產(chǎn)茯苓多糖含量更高、生長速度較快，菌絲旺盛的菌株。對親本和融合子進(jìn)行子實(shí)體的培養(yǎng)。從培養(yǎng)基成分、光照、培養(yǎng)溫度、傳代次數(shù)幾個因素進(jìn)行試驗(yàn)，對茯苓菌株在實(shí)驗(yàn)室條件下形成子實(shí)體的最佳條件進(jìn)行了探討。實(shí)驗(yàn)

3、結(jié)果表明,茯苓菌株在PDA培養(yǎng)基下培養(yǎng)溫度27 ℃,光照強(qiáng)度50 ％，培養(yǎng)時間18～30 d，傳代次數(shù)5～7代更容易產(chǎn)生子實(shí)體。
　　 在茯苓液體發(fā)酵中，通過培養(yǎng)條件和培養(yǎng)基的優(yōu)化，探討不同通氣條件下茯苓最適培養(yǎng)環(huán)境，以利于菌絲體生長及多糖的分泌，并分析多糖分子量的分布。
　　 結(jié)果顯示在茯苓液體發(fā)酵中加入4％的橄欖油，在26℃，轉(zhuǎn)速120 rpm的條件，既有利于菌絲生長，又有利于多糖的分泌。在發(fā)酵罐中培養(yǎng)，通氣量為2

4、vvm時較佳，可得到0.22 mg/mL的胞外多糖。
　　 采用優(yōu)化后的工藝條件，運(yùn)用 Origin軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理，得到了茯苓發(fā)酵過程的動力學(xué)數(shù)學(xué)模型和模型參數(shù)，同時對實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)與模型進(jìn)行了驗(yàn)證比較。在裝液量3L/5L、攪拌槳轉(zhuǎn)速120 r/min、接種量8％和通氣量2 vvm條件下,發(fā)酵得到胞外多糖濃度可達(dá)到37.54 mg/dL，模型計算與實(shí)驗(yàn)結(jié)果擬合曲線呈現(xiàn)一致，模型良好地反應(yīng)了茯苓真菌菌體及胞外多糖的發(fā)酵過程及其動力學(xué)機(jī)