基于meq基因的MDV感染PCR檢測方法的建立與應用研究.pdf

1、馬立克氏病(Marek's Disease，MD)是由馬立克氏病病毒(Marek'sDisease Virus，MDV)引起的一種雞的惡性淋巴細胞增生性腫瘤疾病，具有高度接觸傳染性，可在各種內(nèi)臟器官、皮膚等多處誘發(fā)廣泛性淋巴細胞增生性腫瘤。感染后大量淋巴細胞發(fā)生損傷和轉(zhuǎn)化，引起雞體持續(xù)性免疫抑制、導致患病雞群原發(fā)或繼發(fā)感染引起的死淘率升高。隨著MD毒株毒力不斷增強，通過疫苗免疫已不能為商業(yè)雞群提供完全保護力，給目前養(yǎng)禽業(yè)帶來巨大的損失。

2、一般在生產(chǎn)上使用基于疫苗株與野毒株132-bpr基因拷貝數(shù)差異而建立的多聚酶鏈式反應(PCR)檢測方法進行MDV感染快速診斷，但由于疫苗免疫、個體差異和不同毒株的體內(nèi)復制能力不同等因素共同作用，造成檢出率偏低，診斷準確性不足，本試驗旨在建立一種更為準確的MDV感染PCR檢測方法。
　　 meq基因作為MDV特有的致瘤相關(guān)基因，在不同毒株間的序列保守性較高，而且其能在感染細胞和轉(zhuǎn)化腫瘤組織細胞中高度表達。因此，本研究基于其上述特點

3、，將其確定為建立的PCR檢測方法的靶基因，通過生物軟件設(shè)計出一對擴增其部分保守序列的引物，建立起一種用于快速診斷MDV感染的PCR檢測方法。隨后，將所建立方法與其他檢測MDV感染的PCR方法即實時定量PCR檢測方法和132-bpr檢測方法，對強毒株攻毒試驗中采集的140份組織臟器樣品進行檢測對比試驗。
　　 實時定量PCR檢測方法雖然具有最高的檢測準確性，但是其儀器與試劑價格昂貴，造成檢測成本過高，不適合于基礎(chǔ)實驗室的檢測應用。