豬腮腺分泌蛋白表達特性及表達調(diào)控元件的研究.pdf

1、腮腺分泌蛋白(PSP)由于它的功能與免疫相關，引起了人們的關注。為了弄清PSP的表達情況，以及它與α-AMY(α-Amylase)表達的關系，本研究根據(jù)已知的cDNA序列設計引物，利用RT-PCR、熒光定量PCR(Q-PCR)對豬及小鼠的PSP、AMY在腮腺生后發(fā)育不同時期的表達情況進行了研究。結果表明，豬與小鼠的PSP在腮腺生后發(fā)育的各時期都是高效表達的，而且PSP的表達量隨發(fā)育期呈動態(tài)變化；并且與AMY的變化方向一致，推測二者存在協(xié)

2、同性表達。隨后的Northern雜交和Western雜交證實了，PSP在mRNA水平和蛋白水平也是高效表達的?！　ωiPSP的全長氨基酸序列進行了抗原決定簇分析，推測豬PSP有4個抗原決定簇，分別位于PSP蛋白的22-37aa，41-59aa，180-195aa以及C-端。經(jīng)過比較，按其中之一合成短肽，將短肽與匙孔血藍蛋白連接，免疫家兔，獲得了抗豬PSP抗血清。從蛋白質(zhì)水平對其表達情況進行了研究。在整個研究過程中，將a-唾液淀粉酶及三

3、磷酸甘油醛脫氫酶的表達情況作為對照。研究發(fā)現(xiàn)PSP在豬及小鼠中都呈腮腺特異性高效表達，表達量在不同發(fā)育期呈動態(tài)變化，且始終高于GAPDH。并且在6周齡小鼠腮腺中發(fā)現(xiàn)了一個20KDa的蛋白，能與PSP抗體發(fā)生反應?！　≡诘诙糠种?，首先利用RLM-5’RACE進行了豬PSP轉錄起始位點的定位，結果表明，通過RLM-5’RACE得到的序列比現(xiàn)有的cDNA序列的5’端長39個堿基。分析發(fā)現(xiàn)，現(xiàn)有的豬PSP基因的開放閱讀框(ORF)有誤，豬O