表達(dá)H5AIVHA基因重組雞痘病毒的免疫效力試驗(yàn)及CEF感染rFPV-SYHA后的動(dòng)態(tài)定位和超微結(jié)構(gòu)的觀察.pdf

1、重組雞痘病毒活載體疫苗的研究在近十幾年來(lái)取得了很大進(jìn)展，從根本意義上顯示出常規(guī)疫苗無(wú)可比擬的優(yōu)勢(shì)，已有多種病原的保護(hù)性抗原在FPV中得以表達(dá)，其中包括表達(dá)禽流感HA的重組活載體疫苗。本文對(duì)單表達(dá)禽流感H5亞型血凝素(HA)基因的的重組雞痘病毒的免疫效力做了評(píng)估，并對(duì)CEF感染rFPV-H5HA后進(jìn)行了定位研究。 1.重組雞痘病毒rFPV-SYHA在SPF雞上的免疫效力實(shí)驗(yàn) 將SPF雞隨機(jī)分為5組，每組6羽，將rFPV-S

2、YHA用滅菌PBS進(jìn)行稀釋?zhuān)庖邉┝糠謩e為2×104、2×103、2×102、20及2 PFU/羽。以頸部皮下注射方式進(jìn)行免疫。于免疫后的第21天，將SY株AIV經(jīng)PBS稀釋后，以1×105EID50/羽的劑量通過(guò)滴鼻點(diǎn)眼途徑進(jìn)行攻毒。攻毒后連續(xù)觀察兩周，統(tǒng)計(jì)發(fā)病死亡情況，并于攻毒后的第2、4和7天對(duì)各組雞采集氣管及泄殖腔棉拭子，接種10日齡SPF雞胚做病毒分離試驗(yàn)。與rFPV(2PFU)免疫組相比，rFPV(2×104 PFU)及全病

3、毒滅活疫苗在攻毒后第4天顯著降低了氣管的排毒率。其它時(shí)間點(diǎn)上，各免疫組之間的排毒率無(wú)顯著差異。與未免疫攻毒對(duì)照組相比，rFPV(2×102 FPU)及以上劑量組均顯著降低了死亡率，其中rFPV(2×104 PFU)免疫組未出現(xiàn)發(fā)病及死亡。rFPV(2×103 PFU)及更低的免疫劑量組均有不同程度死亡。所有試驗(yàn)雞分別在免疫后6，13，21采血，分離血清，用HI試驗(yàn)測(cè)定血清中的抗體效價(jià)。 2.CEF感染rFPV-H5HA后的動(dòng)態(tài)定

4、位和超微結(jié)構(gòu)的觀察 本實(shí)驗(yàn)運(yùn)用間接酶免疫組織化學(xué)方對(duì)培養(yǎng)的成纖維細(xì)胞上接種重組雞痘病毒上表達(dá)的HA基因進(jìn)行定位檢測(cè)和直觀判斷，結(jié)果表明抗H5單克隆抗體稀釋濃度為1：200時(shí)，免疫染色效果較好。HA蛋白的表達(dá)中，胞漿型，胞膜型，胞核型都能見(jiàn)到，最常見(jiàn)的是前兩種，且在接種病毒12小時(shí)后才有陽(yáng)性表達(dá)。表達(dá)量隨時(shí)間的增加并無(wú)顯著增加，推測(cè)這與重組病毒時(shí)所用啟動(dòng)子有關(guān)。利用透射電鏡觀察發(fā)現(xiàn)，CEF細(xì)胞感染rFPV-H5HA48h后，才在C