血常規(guī)尿常規(guī)白帶常規(guī)血型檢測的操作規(guī)范及質(zhì)量控制

1、孕前優(yōu)生血、尿、血型及陰道分泌物檢測---操作規(guī)范＆質(zhì)量控制,,內(nèi)容提要,血液學(xué)檢驗(yàn)的操作規(guī)范及質(zhì)量控制尿常規(guī)檢測的操作規(guī)范及質(zhì)量控制陰道分泌物檢測的操作規(guī)范及質(zhì)量控制ABO血型檢測的操作規(guī)范及質(zhì)量控制,血液學(xué)檢驗(yàn)的操作規(guī)范及質(zhì)量控制,概述血液學(xué)檢測的操作規(guī)范血液學(xué)檢測的質(zhì)量控制危機(jī)值報(bào)告,一、概述,發(fā)展歷程 由手工操作進(jìn)入半自動儀計(jì)數(shù)，再進(jìn)入全自動血細(xì)胞分析儀測定，直到目前的全自動血細(xì)胞分析流水線這個里程碑

2、式的歷程，見證了血常規(guī)檢驗(yàn)技術(shù)的進(jìn)步。,概念 血液的一般檢查（血常規(guī)檢查)：是對血液中的有形成分（紅細(xì)胞、白細(xì)胞和血小板）的數(shù)量和質(zhì)量進(jìn)行檢測。包括全血細(xì)胞計(jì)數(shù)和白細(xì)胞的分類計(jì)數(shù)。,三分類與五分類：儀器檢測原理 三分類大都采用電阻抗檢測技術(shù)；五分類的產(chǎn)品大 都采用光散射檢測技術(shù)。白細(xì)胞分類方法 三分群是將白細(xì)胞分為淋巴細(xì)胞，單核細(xì)胞，粒細(xì)胞；五分群則是將白細(xì)胞分為淋巴細(xì)胞、單核細(xì)胞、粒細(xì)胞（中性細(xì)胞、嗜

3、酸性細(xì)胞、嗜堿性細(xì)胞）。,二、血液學(xué)檢測的操作規(guī)范,2. 三分類原理——電阻抗法,在待測液體中置一微孔，在微孔的兩端各加一定電壓的電極，當(dāng)液體中的顆粒經(jīng)過微孔時(shí)，電極間的電阻就會產(chǎn)生訓(xùn)瞬間的變化，因而產(chǎn)生電脈沖，對這種電脈沖進(jìn)行計(jì)數(shù)就可得到顆粒的數(shù)量，脈沖幅度的大小表示顆粒的體積的大小，經(jīng)過對各種細(xì)胞所產(chǎn)生脈沖的大小的電子的選者擇，可以區(qū)分出不同種類的細(xì)胞；在液體中加上一定的負(fù)壓就能使經(jīng)過微孔的液體流動,3. 五分類檢測原理,容量、傳導(dǎo)

4、、光散射分類法（VCS）阻抗、射頻和特殊稀釋液處理的聯(lián)合分類多角度偏振光三色分類法（MAPSS）光散射與細(xì)胞化學(xué)技術(shù)聯(lián)合應(yīng)用分類法利用激光流式細(xì)胞分析系統(tǒng)加核酸熒光染色技術(shù)分類法,4. 操作規(guī)程,開機(jī)后先做質(zhì)控，質(zhì)控通過后進(jìn)行樣本檢測將合格樣本編號，待檢標(biāo)本檢測1.上下顛倒試管將內(nèi)容物充分混勻，檢查有無 凝血。2.將試管正確放入試管架上。3.按start鍵，樣品開始吸取。4.當(dāng)ready led 暗（并發(fā)出兩聲短音）

5、移開試管。5.當(dāng)ready led再次亮起時(shí)，準(zhǔn)備下一個樣品，重復(fù)上述步驟。,5.鏡檢篩選,為了保證血液分析結(jié)果準(zhǔn)確，鏡檢是細(xì)胞形態(tài)分析的最終手段。2005年國際血液學(xué)復(fù)檢專家組經(jīng)詳細(xì)分析后，制定了41條指導(dǎo)性自動血細(xì)胞分析和分類的復(fù)檢標(biāo)準(zhǔn)。三分群血液分析儀：100%顯微鏡WBC分類及血細(xì)胞形態(tài)檢查。,三、血液學(xué)檢測的質(zhì)量控制,分析前質(zhì)量控制分析中質(zhì)量控制分析后質(zhì)量控制,四、危機(jī)值報(bào)告,RBC ≤2.5×1012/L

6、 HGB＜50g/L 或＞250g/LPLT＜ 30×109/L或＞600×109/LWBC＜2.0×109/L或＞28.0×109/L,,尿常規(guī)檢測的操作規(guī)范及質(zhì)量控制,,尿液檢驗(yàn)的流程尿液干化學(xué)檢查尿沉渣顯微鏡檢查,一、尿液檢驗(yàn)流程,二、尿液干化學(xué)檢查,（一）尿液干化學(xué)分析的發(fā)展1956年：美國人Ames和Lilly發(fā)明了尿糖干化學(xué)試帶1957年：利用“蛋白質(zhì)誤差”的原理推

7、出尿蛋白檢測試帶，1958年：推出尿糖、尿蛋白二聯(lián)試帶1959年：推出尿糖、尿蛋白、尿pH三聯(lián)試帶20世紀(jì)70年代：第一臺干化學(xué)分析儀問世 ——現(xiàn)代尿液分析自動化的標(biāo)志試帶逐步發(fā)展到多項(xiàng)，八聯(lián)、十聯(lián)、十一聯(lián)、十二聯(lián)從目測發(fā)展到自動化儀器檢測，由半自動化到全自動化 國產(chǎn)試劑代替進(jìn)口試劑。,（二）尿干化學(xué)分析儀分類,按自動化程度 1.半自動尿液分析儀： 2.全自動尿液分析儀：按

8、檢測項(xiàng)目8項(xiàng)：pH、PRO、GLU、KET、 BIL、URO、BLD、NIT 10項(xiàng)：8項(xiàng) + LEU、SG 11項(xiàng)：10項(xiàng) + VitC 12項(xiàng)：10項(xiàng) + 顏色、透明度,（三）尿液分析儀的原理尿液分析儀的測試原理主要有以下三個方面尿液分析儀的試劑帶原理尿液分析儀測量原理尿液分析儀計(jì)算原理,（四）尿干化學(xué)試劑帶的使用規(guī)范操作人員必須仔細(xì)閱讀試帶性能和儀器的操作方法；操作中應(yīng)充分混勻新鮮尿液標(biāo)本；將試

9、帶全部迅速浸入尿液標(biāo)本；試帶從標(biāo)本中取出時(shí)，除去多余的尿液可疑結(jié)果必須進(jìn)行確診實(shí)驗(yàn)；干化學(xué)實(shí)驗(yàn)結(jié)果應(yīng)與理學(xué)、顯微鏡結(jié)果相關(guān)聯(lián)。不能丟掉鏡檢,（五）尿干化學(xué)檢測的質(zhì)量控制,分析前質(zhì)量控制人員培訓(xùn)建立標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程尿液標(biāo)本的采集及保存儀器設(shè)備定期校準(zhǔn)和保養(yǎng)尿試紙的正確使用質(zhì)控品的選擇,三、尿沉渣顯微鏡檢查,尿沉渣檢測是對尿液離心沉淀物中有形成分的鑒定。傳統(tǒng)的尿沉渣檢測包括用顯微鏡對尿沉渣進(jìn)行定性、定量檢查以及各種有形成分

10、的計(jì)數(shù)檢測；現(xiàn)在可用尿液分析儀(試紙條法)及尿沉渣自動分析儀，對尿中某些有形成分進(jìn)行自動檢測。,尿液顯微鏡檢測,方 法取混勻新鮮晨尿10ml，1500rpm離心5min，留沉淀物0.25-0.35ml混勻取50 ?l涂片以弱光低倍鏡觀察，用高倍鏡辨認(rèn)記錄各類細(xì)胞或各類管型在10個視野內(nèi)所見到的最低和最高數(shù)目,紅細(xì)胞尿沉渣中不染色紅細(xì)胞典型形狀為淺黃色雙凹盤狀。但受PH、滲透壓及紅細(xì)胞來源的影響，可發(fā)生變化。堿性尿中紅細(xì)胞邊緣

11、不規(guī)則，高滲尿中紅細(xì)胞因脫水皺，呈表面帶刺、顏色較深的桑葚狀；低滲尿中紅細(xì)胞因吸水脹大，并可有血紅蛋白逸出，呈大小不等的空環(huán)形，稱紅細(xì)胞淡影。參考值：正常平均每高倍視野0-3個，>3個/HP稱鏡下血尿。定量檢查0-5個/μL。,尿液中主要的有形成分,白細(xì)胞和膿細(xì)胞白細(xì)胞外形完整，分散存在，以中性粒細(xì)胞多見。膿細(xì)胞是指在炎癥過程中破壞或死亡的中性粒細(xì)胞，外形不規(guī)則，常成堆聚集存在。參考值：正常平均0-5個/高倍視野，定量檢查0

12、-10個/μL,上皮細(xì)胞：尿液中上皮細(xì)胞來自腎至尿道的整個泌尿系統(tǒng)，包括腎小管上皮細(xì)胞、移行上皮細(xì)胞和復(fù)層扁平上皮細(xì)胞。,管型尿液中的蛋白在腎小管內(nèi)凝集而成，尿內(nèi)出現(xiàn)管型是腎實(shí)質(zhì)病變的證據(jù)。如急性腎小球腎炎多見透明管型和顆粒管型，慢性腎小球腎炎多見細(xì)、粗顆粒管型；在慢性腎炎，腎病綜合癥，高血壓腎損傷時(shí)可見透明管型增多。,結(jié)晶,尿中出現(xiàn)結(jié)晶稱晶體尿。尿液中是否析出結(jié)晶。取決于某些物質(zhì)在尿液中的溶解度、濃度、pH、溫度及膠體狀況等因素

13、。當(dāng)種種促進(jìn)與抑制結(jié)晶折出的因子和使尿液過飽和狀態(tài)維持穩(wěn)定動態(tài)平衡的因素失衡時(shí)，則可見結(jié)晶折出。,報(bào)告方式,分?jǐn)?shù)報(bào)告法 細(xì)胞成分： 最低 ~ 最高/HPF 管型成分： 最低 ~ 最高/LPF加號報(bào)告法以有形成分占視野面積來判定，1/4視野為+，滿視野為++++。多用于細(xì)胞數(shù)極多和結(jié)晶、粘液絲、脂肪滴、細(xì)菌等的報(bào)告。定量報(bào)告法 （ /ml /ul）,質(zhì)量控制,標(biāo)本量應(yīng)達(dá)到10ml，離心速度在1

14、500 r/min ，5min。細(xì)胞等有形成分較多時(shí)，應(yīng)在載玻片上選擇較薄處進(jìn)行檢查，防止因遮蓋漏報(bào)或少報(bào)。觀察管型時(shí)光線不能太強(qiáng)，避免透明管型的漏檢。,陰道分泌物檢測的操作規(guī)范及質(zhì)量控制,概述標(biāo)本采集及處理陰道分泌物檢查的規(guī)范化程序質(zhì)量控制,一、概述,女性生殖系統(tǒng)分泌的液體，俗稱“白帶”，主要是由宮頸腺體和前庭大腺的分泌物組成，也含有來自子宮內(nèi)膜和陰道黏膜的分泌物。常用于女性生殖系統(tǒng)炎癥、腫瘤的診斷及雌激素水平的判斷。,二

15、、標(biāo)本的采集及處理,常由婦產(chǎn)科醫(yī)師給檢驗(yàn)對象采集，取材后，棉拭子放于生理鹽水試管內(nèi)。制成生理鹽水涂片固定、染色,患者準(zhǔn)備：在采集標(biāo)本前24小時(shí)內(nèi)應(yīng)無性交、無盆浴、無陰道灌洗、近期內(nèi)未服用激素類藥物。標(biāo)本要求：用無菌棉拭子從陰道后穹隆處取分泌物；所用窺陰器不可用潤滑劑，只能用少量無菌等滲鹽水潤濕。標(biāo)本儲存：取材后應(yīng)立刻檢查，避免因放置時(shí)間太久影響滴蟲的活動性或蟲體受到破壞使檢查結(jié)果受到影響。 標(biāo)本運(yùn)輸：一般室溫運(yùn)輸，如冬季氣溫較

16、低應(yīng)注意保溫運(yùn)輸。,三、陰道分泌物檢查的規(guī)范化程序,1. 一般性狀檢查：外觀檢查：正常陰道分泌物為白色稀糊狀，無氣味，其量多少與雌激素水平高低和生殖器官充血程度有關(guān)。PH值：在生理情況下，由于陰道桿菌的作用使正常健康婦女陰道pH<5.0。 【參考值】pH 4.0～4.5,一般性狀檢查,陰道清潔度檢查,【檢測方法】,①涂片,②高倍鏡,③觀察判斷陰道清潔度,,,,,,,,,,,2. 顯微鏡檢查,濕片檢查,,,a.NS1滴,,,b

17、.標(biāo)本涂抹混勻,,分級,,,微生物及寄生蟲檢查滴蟲 主要是陰道毛滴蟲，致滴蟲性陰道炎。檢測采用生理鹽水懸滴法或濕片法，滴蟲呈梨形，后端尖，約為白細(xì)胞的2～3倍大小。低倍顯微鏡下可見波動狀或螺旋狀運(yùn)動。,,真菌 采用懸滴法于低倍鏡下可見到白色絲假酵母菌的卵圓形孢子和假菌絲。如取陰道分泌物涂片并時(shí)行革蘭氏染色后油觀察，可見芽孢、孢子或與出芽細(xì)胞相連接的菌絲，成鏈狀及分支狀。,陰道加德納菌 陰道加德納菌為革蘭氏染色陰性或染色不

18、定小桿菌。大小為1.5-2.5μm，具有多形性，呈桿狀或球桿狀，致陰道分泌物PH＞4.5，胺試驗(yàn)陽性。,淋球菌 革蘭氏染色陰道性雙球菌，形似腎或咖啡豆?fàn)?，凹面相對，除散在于白?xì)胞之間外，還可見其被吞噬于中性粒細(xì)胞胞質(zhì)之內(nèi)，因淋病奈瑟菌對各種理化因子抵抗力弱，涂片法可被漏診，必要時(shí)可進(jìn)行淋病奈瑟菌培養(yǎng)，且有利于菌株分型和藥過敏試驗(yàn)。,四、質(zhì)量控制,結(jié)果報(bào)告應(yīng)全面，符合規(guī)范；首先報(bào)告陰道分泌物清潔度，其次報(bào)告所發(fā)現(xiàn)的病原微生物。分析

19、檢測結(jié)果之間的關(guān)聯(lián)性。檢驗(yàn)報(bào)告的審核、簽發(fā)、登記。,ABO血型檢測的操作規(guī)范及質(zhì)量控制,概述ABO血型鑒定的標(biāo)準(zhǔn)化操作規(guī)程ABO血型檢測的質(zhì)量控制常見的問題,一、概述,血型的概念血型(blood group)是人體血液的一種遺傳性狀。20世紀(jì)初發(fā)現(xiàn)紅細(xì)胞ABO血型系統(tǒng)以來，血型的概念僅指紅細(xì)胞表面抗原的差異。隨著對血型研究的進(jìn)展，白細(xì)胞、血小板和血清中血型抗原的發(fā)現(xiàn)，血型已被認(rèn)為是指各種血液成分的遺傳多態(tài)性標(biāo)記 。,Karl

20、 Landsteiner奧地利科學(xué)家1901年發(fā)現(xiàn)人類ABO血型系統(tǒng),二、標(biāo)準(zhǔn)化操作規(guī)程,方法一：玻片法試驗(yàn)原理：根據(jù)紅細(xì)胞上有或無A抗原或/和B抗原，將血型分為A型、B型、AB型及O型四種。A型紅細(xì)胞膜上含有A抗原，B型紅細(xì)胞膜上含有B抗原，AB型紅細(xì)胞膜上含有A、B抗原，抗A、抗B試劑是分別針對A抗原和B抗原的特異性抗體。可利用紅細(xì)胞凝集試驗(yàn)，通過正、反定型準(zhǔn)確鑒定ABO血型。適用范圍：初篩血型或普通體檢,操作步驟：取清潔

21、玻片1張（或白瓷板1塊），用肥皂水刷洗后晾干，用蠟筆劃出小格，并注明A、B字樣。將抗A試劑、抗B試劑各一滴分別滴于玻片（或瓷盤）上A、B處。分別取等體積待檢血樣（5％-10％紅細(xì)胞懸液或全血）于抗A試劑和抗B試劑。另取潔凈玻片1張（或白瓷板1塊），用記號筆劃成方格，標(biāo)明A細(xì)胞、B細(xì)胞和O細(xì)胞，用滴管各加受檢者血清1滴，再分別用滴管滴加A、B和O型試劑紅細(xì)胞懸液1滴。用不同的竹簽將分型試劑與待檢血樣調(diào)勻，同時(shí)不停的搖動玻片（或瓷盤）并

22、觀察血型凝集（或溶血）反應(yīng)。如以玻片做試驗(yàn)時(shí)，也可用低倍鏡觀察結(jié)果。,方法二：試管法試驗(yàn)原理：根據(jù)紅細(xì)胞上有或無A抗原或/和B抗原，將血型分為A型、B型、AB型及O型四種?？衫眉t細(xì)胞凝集試驗(yàn)，通過正、反定型準(zhǔn)確鑒定ABO血型。正定型，是用已知的抗A、抗B分型血清來測定紅細(xì)胞膜上有無相應(yīng)的A抗原或/和B抗原所謂；反定型是用已知A細(xì)胞和B細(xì)胞來測定血清中有無相應(yīng)的抗A或/和抗B。試劑：抗A、抗B分型標(biāo)準(zhǔn)血清（單克隆抗體）

23、 2﹪～4﹪A1型、B型和O型試劑紅細(xì)胞懸液受檢者新鮮血清受檢者2﹪～4﹪紅細(xì)胞鹽水懸液,操作步驟：1.取潔凈試管2支，分別標(biāo)記：編號、抗A抗B2.分別加抗A、抗B分型血清各2滴于試管底部，再以吸管分別加入受檢者2﹪～4﹪紅細(xì)胞鹽水懸液1滴，混合3.取潔凈試管3支，分別標(biāo)記：編號、AC、BC、OC4.用吸管分別加入受檢者血清2滴于試管底部，再分別加入2﹪～4﹪A1型、B型和O型試劑紅細(xì)胞懸液1滴，混合。5.取潔凈試管1支，

24、標(biāo)記:編號、自身6.用試管分別加入受檢者血清2滴和受檢者紅細(xì)胞懸液1滴混合。7.離心：根據(jù)試劑說明書選擇離心轉(zhuǎn)速和。8.待離心機(jī)停止后，取出試驗(yàn)管，肉眼觀察有無溶血現(xiàn)象，然后將試管輕輕搖動，使沉于管底的紅細(xì)胞再懸浮，觀察凝聚強(qiáng)度，必要時(shí)以低倍鏡觀察結(jié)果時(shí)間,方法三：微柱凝膠法原理：在微柱凝膠介質(zhì)中，紅細(xì)胞抗原與相應(yīng)抗體結(jié)合，利用凝膠的空間位阻，經(jīng)低速離心，凝集的紅細(xì)胞懸浮在凝膠上層，而未和抗體結(jié)合的紅細(xì)胞則沉于凝膠低部（管底尖部

25、）。,微柱凝膠結(jié)果判定標(biāo)準(zhǔn),三、ABO血型檢測的質(zhì)量控制,人員培訓(xùn)、考核標(biāo)準(zhǔn)化操作規(guī)程儀器性能的評估實(shí)驗(yàn)室內(nèi)溫濕度、冰箱狀態(tài)等外部供應(yīng)的評估（試劑、耗材等）室內(nèi)質(zhì)控室間質(zhì)評結(jié)果審核臨床溝通,四、ABO血型鑒定中常見問題,工作中經(jīng)常遇到血型鑒定錯誤或正反定型不符的情況，除了個別疑難血型出現(xiàn)的技術(shù)上的原因外，更多的是由于標(biāo)本的采集、離心、判讀等非技術(shù)因素造成血型鑒定結(jié)果錯誤，很可能而發(fā)生重大的醫(yī)療差錯或事故。,血型鑒定操作的