豐富環(huán)境干預(yù)對(duì)帕金森大鼠中腦miR-133b表達(dá)影響的研究.pdf

1、【背景】
　　帕金森?。≒arkinson's diease,PD）是一種常見(jiàn)的慢性進(jìn)行性神經(jīng)退行性變性疾病，其主要的臨床表現(xiàn)為靜止性震顫、肌強(qiáng)直、運(yùn)動(dòng)遲緩以及平衡障礙等運(yùn)動(dòng)癥狀，同時(shí)還有精神障礙、認(rèn)知障礙、自主神經(jīng)功能障礙等非運(yùn)動(dòng)癥狀。PD病因及發(fā)病機(jī)制至今仍未徹底明確，因而仍然沒(méi)有一種有效的方法能防治這類疾病。目前研究已經(jīng)表明豐富環(huán)境（enriched environment,EE）可以通過(guò)影響神經(jīng)可塑性，在腦損傷后起到康復(fù)治

2、療作用，但其作用機(jī)制尚不明確?，F(xiàn)已發(fā)現(xiàn)miR-133b能在中腦多巴胺能神經(jīng)元中特異性表達(dá)，并發(fā)現(xiàn)miR-133b在中腦多巴胺能神經(jīng)元的成熟、功能和存活上起著重要的作用。本實(shí)驗(yàn)通過(guò)構(gòu)建PD大鼠模型，在豐富環(huán)境干預(yù)后研究miR-133b的表達(dá)水平，探討豐富環(huán)境對(duì)PD治療的可能機(jī)制。
　　第一部分豐富環(huán)境干預(yù)對(duì)帕金森大鼠行為學(xué)及多巴胺能神經(jīng)元表達(dá)的影響
　　【目的】
　　探討豐富環(huán)境干預(yù)對(duì)帕金森大鼠行為學(xué)改變、多巴胺能神經(jīng)元

3、的表達(dá)的影響，以期闡明EE治療PD的可能機(jī)制。
　　【方法】
　　6-羥基多巴胺(6-OHDA)單側(cè)毀損紋狀體制作PD大鼠模型，造模成功大鼠隨機(jī)分成2組（每組6只）：PD模型大鼠+豐富環(huán)境干預(yù)組（PD+EE組），PD模型大鼠+標(biāo)準(zhǔn)環(huán)境干預(yù)組（PD+SE組）。另設(shè)兩組（每組6只）為假手術(shù)大鼠+豐富環(huán)境干預(yù)組（sham+EE組）、假手術(shù)大鼠+標(biāo)準(zhǔn)環(huán)境干預(yù)組（sham+SE組）。每組分別給予豐富環(huán)境、標(biāo)準(zhǔn)環(huán)境干預(yù)6周，干預(yù)結(jié)束后進(jìn)

4、行大鼠平衡木試驗(yàn)觀察大鼠失足比例，評(píng)估大鼠行為學(xué)改變，隨后行大鼠腦組織免疫組化比較TH免疫陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)目和TH免疫陽(yáng)性纖維灰度值，從而觀察多巴胺能神經(jīng)元表達(dá)情況。
　　【結(jié)果】
　　1、標(biāo)準(zhǔn)環(huán)境干預(yù)下，PD模型大鼠失足比例為2.40％±0.150%，假手術(shù)組為0.00%±0.000%，兩者比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（Z=-3.614,P＜0.01），前者多于后者。豐富環(huán)境干預(yù)6周的PD大鼠失足比例為0.19%±0.064%，與標(biāo)準(zhǔn)

5、環(huán)境干預(yù)6周的大鼠比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（Z=-2.763,P＜0.05），前者少于后者。
　　2、標(biāo)準(zhǔn)環(huán)境干預(yù)下，PD模型大鼠損毀側(cè)紋狀體 TH免疫陽(yáng)性纖維灰度值為1.0091±0.4857，假手術(shù)組為2.8373±0.4674，兩者比較，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（Z=-2.882，P＜0.01），前者低于后者；PD模型大鼠損毀側(cè)黑質(zhì)TH免疫陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)目為123.17±25.89，假手術(shù)組為346.67±15.95，兩者比較，差異有統(tǒng)

6、計(jì)學(xué)意義（Z=-2.882，P＜0.01），前者少于后者。
　　PD模型大鼠中，豐富環(huán)境干預(yù)6周損毀側(cè)紋狀體 TH免疫陽(yáng)性纖維灰度值為1.6711±0.4803，與標(biāo)準(zhǔn)環(huán)境干預(yù)6周比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（Z=-2.082，P＜0.05），前者高于后者；豐富環(huán)境干預(yù)6周損毀側(cè)黑質(zhì)TH免疫陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)目為184.17±24.31，與標(biāo)準(zhǔn)環(huán)境干預(yù)6周比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（Z=-2.722，P＜0.01），前者多于后者。
　　假手術(shù)

7、組大鼠中，豐富環(huán)境干預(yù)6周損毀側(cè)紋狀體TH免疫陽(yáng)性纖維灰度值為3.7785±0.2122，與標(biāo)準(zhǔn)環(huán)境干預(yù)6周比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（Z=-2.882，P＜0.01），前者高于后者；豐富環(huán)境干預(yù)6周損毀側(cè)紋黑質(zhì)TH免疫陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)目為459.50±37.09，與標(biāo)準(zhǔn)環(huán)境干預(yù)6周比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（Z=-2.887，P＜0.01），前者多于后者。
　　【結(jié)論】
　　豐富環(huán)境干預(yù)可增加PD大鼠黑質(zhì)-紋狀體系統(tǒng)多巴胺能神經(jīng)元數(shù)目，

8、改善PD模型大鼠行為學(xué)。
　　第二部分豐富環(huán)境干預(yù)對(duì)帕金森大鼠中腦miR-133b表達(dá)的影響
　　【目的】
　　觀察豐富環(huán)境干預(yù)對(duì)PD大鼠中腦miR-133b表達(dá)的影響，探討其治療PD的可能機(jī)制。
　　【方法】
　　6-OHDA單側(cè)毀損紋狀體制作PD大鼠模型，造模成功大鼠隨機(jī)分成2組（每組6只）：PD+豐富環(huán)境干預(yù)組（P1組），PD+標(biāo)準(zhǔn)環(huán)境干預(yù)組（P2組）。另設(shè)兩組（每組6只）為假手術(shù)+豐富環(huán)境干預(yù)組（S

9、1組）、假手術(shù)+標(biāo)準(zhǔn)環(huán)境干預(yù)組（S2組）。每組分別給予不同環(huán)境干預(yù)6周，干預(yù)結(jié)束后取大鼠中腦提取總RNA，逆轉(zhuǎn)錄為cDNA后進(jìn)行熒光定量PCR，測(cè)定miR-133b的相對(duì)表達(dá)水平。
　　【結(jié)果】
　　標(biāo)準(zhǔn)環(huán)境中，PD模型大鼠中腦miR-133相對(duì)表達(dá)量為1.6833±0.0367，假手術(shù)組為0.6883±0.0650，兩者比較，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t=23.093，P＜0.01），前者高于后者；豐富環(huán)境干預(yù)的PD模型大鼠中腦