益腎達絡飲對實驗性自身免疫性腦脊髓炎小鼠神經功能評分和病理特征的影響_朱文浩

1、濕”，可見附子之用廣矣。然附子有毒，應用時不可不慎。陶弘景《本草經集注》:“俗方每用附子須甘草、人參、生姜相互配合者，正制其毒也”，如仲景四逆湯姜、甘草同用可以師法。近代應用要么配姜、甘草，要么先煎以減其毒性。筆者常將其與諸藥和等量生姜一起浸泡1h，并一起煎1h，更為安全。“附子之功，在于能溫五臟之陽”，“重視陽氣，肇始于《內經》‘陽氣者若天與日，失其所則折壽而不彰’”［7］，火神派的主要學術思想在于重視陽氣，崇尚扶陽，扶陽之關鍵在于善

2、用巧用附子、生姜、干姜、桂收稿日期:2013－01－04基金項目:國家自然科學基金資助課題(81072770，81202657)作者簡介:朱文浩(1981－)，男，山東臨沭人，2011級博士研究生，研究方向:神經系統(tǒng)病的中醫(yī)藥防治研究。通訊作者:高穎，女，北京人，主任醫(yī)師，博士研究生導師，研究方向:神經系統(tǒng)疾病的中醫(yī)藥防治研究。枝、肉桂等溫陽藥，尤其是附子?；鹕衽傻淖趲熰崥J安說:“認證只分陰陽”，“功夫全在陰陽上打算”。李可先生說:“暴

3、病多亡陽，久病多傷陽”，“陽氣易傷難復，故陽常不足”［8］。臨床上沉疴痼疾多為陽損不復，所以重用附子可起到良好的療效。參考文獻［1］張成新附子應用體會［J］中華中醫(yī)藥雜志，2011，26(11):2586［2］陸再英，鐘南山內科學［M］7版北京:人民衛(wèi)生出版社出版，2009:648－651［3］吳江神經病學［M］北京:人民衛(wèi)生出版社出版，2005:158－170［4］天津科學技術出版社袖珍中醫(yī)四部經典［M］天津:天津科學技術出版社，19

4、92:643，661［5］侯熙德神經病學［M］3版北京:人民衛(wèi)生出版社出版，1998:189［6］張成新附子應用體會［J］中華中醫(yī)藥雜志，2011，26(11):2586［7］仝小林重劑起沉疴［M］北京:人民衛(wèi)生出版社，2010:231［8］張存悌火神派溫陽九法［M］北京:人民軍醫(yī)出版社，2010:6實驗研究實驗研究益腎達絡飲對實驗性自身免疫性腦脊髓炎小鼠神經功能評分和病理特征的影響朱文浩1，高穎1，關東升2，吳彥青3(1.北京中醫(yī)藥大

5、學東直門醫(yī)院，北京1007002.河南中醫(yī)學院，河南鄭州4500033.天津中醫(yī)藥大學，天津300193)摘要:目的:研究益腎達絡飲對復發(fā)－緩解型EAE小鼠發(fā)病率、發(fā)病時間、復發(fā)率、神經功能評分及病理特征的影響。方法:用HE染色和Luxolfastblue染色觀察EAE小鼠的病理特征。結果:中藥組EAE小鼠的復發(fā)率(1427%)低于模型組(625%)免疫后第21天神經功能評分，中藥組(186040)低于模型組(313069)免疫后第61

6、天神經功能評分，中藥組(086055)低于模型組(275073)，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。結論:益腎達絡飲能降低EAE小鼠的復發(fā)率、神經功能評分，減輕炎性細胞浸潤和髓鞘脫失，但其作用機制需要進一步研究。關鍵詞:益腎達絡飲實驗性自身免疫性腦脊髓炎神經功能評分病理特征中圖分類號:R37331文獻標志碼:A文章編號:1000－1719(2013)07－1467－03EffectofYishenDaluoDecoctiononSceo

7、fNeuralFunctionPathologicalFeatureinMicewithExperimentalAutoimmuneEncephalomyelitisZHUWenhao1，GAOYing1，GUANDongsheng2，WUYanqing3(1.DongzhimenHospitalAffiliatedtoBeijingUniversityofChineseMedicine，Beijing100700，China2.Hen

8、anCollegeofTCM，Zhengzhou450003，Henan，China3.TianjinUniversityofTCM，Tianjin300193，China)Abstract:Objective:ToinvestigatetheeffectofYishenDaluoDecoctionontheincidence，onset，relapserate，sceofneuralfunctionpathologicalfeatur

9、einthemicewithrelapsing－remittingexperimentalautoimmuneencephalomyelitisMethods:Hematoxylin－eosinstainingLuxolfastbluestainingwereusedtoobservethepathologicalfeatureinthemicewithexperimentalautoimmuneencephalomyelitisRes

10、ults:Therelapserateofthetreatedgroup(1427%)waslessthanthemodelgroups(62.5%)thesceofneuralfunctionofthetreatedgroup(186040)waslessthanthemodelgroups(313069)attheday21afterimmunizationthesceofneuralfunctionofthetreatedgrou

11、p(086055)waslessthanthemodelgroups(2.75073)attheday61afterimmunization(P＜0.05)Conclusion:AftertreatmentwithYishenDaluoDecoction，therelapseratethesceofneuralfunctionofthemicewithexperimentalautoimmuneencephalomyelitisarer

12、educed，theinfiltrationofinflammatycellsthelossofmyelinarealleviated，buttheeffectivemechanismofYishenDaluoDecoctionneedstobefurtherexpledKeywds:YishenDaluoDecoctionexperimentalautoimmuneencephalomyelitissceofneuralfunctio

13、npathologicalfeature7641遼寧中醫(yī)雜志2013年第40卷第7期疫后第11～13天發(fā)病，平均發(fā)病時間為免疫后(11.830.31)天，發(fā)病率為60.00%(610)，其中2只復發(fā)，復發(fā)率為33.33%(26)。模型組、中藥組、激素組的發(fā)病率、平均發(fā)病天數、平均最高評分及復發(fā)率之間比較差異無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)(見表2)。表2模型組、中藥組和激素組免疫小鼠發(fā)病情況組別發(fā)病率(%)平均發(fā)病時間(d)復發(fā)率(%)模型

14、組80.00(810)12.380.1862.50(58)中藥組77.78(79)12.710.2914.27(17)激素組60.00(610)11.830.3133.33(26)注:各組之間比較，差異無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)。3.2小鼠體重和神經功能評分免疫前各組小鼠體重比較，差異無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)，免疫后各組小鼠每天體重變化見插頁圖1免疫后各組小鼠每天神經功能評分變化情況見插頁圖2。模型組、中藥組和激素組平均最高神經功

15、能評分均出現在免疫后第14天，各組比較差異無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)免疫后第21天，激素組和模型組神經功能評分比較，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)免疫后第61天，中藥組和模型組神經功能評分比較，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)(見表3)。表3免疫后小鼠神經功能評分比較免疫后天數第14天第21天第61天模型組6.380.683.130.692.750.73中藥組5.861.161.860.400.860.55激素組5.830.981.

16、330.211.670.92注:與模型組比較，P＜0.05。3.3病理學改變HE染色結果:正常組小鼠腦和脊髓組織著色均勻，結構完整有序，神經細胞呈橢圓形或圓形，胞質胞核分明，核膜完整，核仁清晰，細胞核呈藍紫色，胞漿和間質呈紅色。神經纖維組織致密，灰、白質界限清晰可辨，白質細胞成分較少，灰質細胞成分比較多，分布均勻，胞漿尼氏體清晰可辨(見插頁圖3)。模型組可見多部位局限性炎性浸潤病灶，炎性病灶多以小血管為中心，向周圍擴展，形成典型的“血管

17、套”改變，炎細胞主要為淋巴細胞，也可見單核吞噬細胞(見插頁圖4)。中藥組和激素組EAE小鼠腦和脊髓炎性浸潤病灶明顯減少，病灶程度明顯減輕(見插頁圖5～圖6)。Luxolfastblue染色結果:正常組小鼠腦和脊髓組織中髓鞘致密，排列整齊有序，神經細胞分布較多(見插頁圖7)。模型組出現多部位髓鞘脫失，以侵犯白質為主，灰質損害不如白質明顯(見插頁圖8)。中藥組和激素組EAE小鼠多部位脫髓鞘程度明顯減輕，髓鞘脫失部位明顯減少(見插頁圖9～10

18、)。4討論MS是一種以中樞神經系統(tǒng)白質炎性脫髓鞘為主要病理特點，遺傳易感因素和環(huán)境因素共同作用引起的自身免疫性疾病［2］，也是常見的影響青壯年的慢性、非創(chuàng)傷性、致殘性神經系統(tǒng)疾病［3］。根據其臨床病程，可分為復發(fā)緩解型(relapsing－remitting，RR)、原發(fā)進展型(primary－progressive，PP)、繼發(fā)進展型(secondary－progressive，SP)和進展復發(fā)型(progressive－relaps

19、ing，PR)［4］。國外資料顯示，RRMS占85%～90%［5－6］，10年后70%～80%的RRMS可發(fā)展為SPMS［8］，引起持續(xù)而嚴重的神經功能缺損癥狀。據報道，我國北方MS患者中RRMS占63.6%，SPMS占25%，PPMS占8.3%，PRMS占3%［7］。因此如何防治RRMS是防治MS的重點，但國內尚無防止MS復發(fā)的有效藥物。益腎達絡飲是針對MS的病機和證候特點擬定的治療MS的有效方劑，臨床應用發(fā)現它能改善MS患者的臨床癥

20、狀，降低復發(fā)率，延長復發(fā)時間。用PLP139－151免疫SJL小鼠建立的EAE模型是研究RRMS的經典動物模型，它在臨床病程特點和病理改變上與MS非常相似。因此，應用此模型進行MS的實驗研究能更好的反應MS的情況。本研究結果發(fā)現，模型組、中藥組、激素組小鼠的發(fā)病率、發(fā)病時間、平均最高評分比較，差異無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)，各組之間的比較具有可比性。雖然各組復發(fā)率比較差異無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)，但中藥組的復發(fā)率(14.27%)明

21、顯低于模型組(62.5%)，說明益腎達絡飲有降低EAE復發(fā)率的趨勢，差異無統(tǒng)計學意義可能與樣本量小有關。研究還發(fā)現，免疫后第21天的神經功能評分，激素組(1.330.21)低于模型組(3.130.69)，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)，說明潑尼松能改善急性期EAE小鼠的神經功能缺損癥狀，其機制可能與其抗炎和免疫調節(jié)作用有關［2］中藥組(1.860.40)與模型組比較，差異無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)，但有改善EAE小鼠神經功能缺損癥狀

22、的趨勢，差異無統(tǒng)計學意義可能與樣本量小有關。免疫后第61天的神經功能評分，中藥組(0.860.55)低于模型組(2.750.73)，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)，說明中藥組能降低復發(fā)期EAE小鼠神經功能評分，與其降低復發(fā)率相關。激素組(1.670.92)與模型組比較，差異無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)，但也有改善EAE小鼠神經功能缺損癥狀的趨勢，差異無統(tǒng)計學意義可能與樣本量小有關。病理學研究發(fā)現，模型組小鼠腦組織中存在大量的炎性細胞浸

23、潤和大面積的髓鞘脫失，而經益腎達絡飲和激素治療后，炎性細胞浸潤減少，髓鞘脫失減輕，說明益腎達絡飲能減輕EAE小鼠的炎性細胞浸潤和髓鞘脫失，從而達到治療EAE的作用?？傊?，益腎達絡飲能降低EAE小鼠的神經功能評分，降低復發(fā)率，減輕炎性細胞浸潤和髓鞘脫失，但其作用機制需要進一步研究。參考文獻［1］WeaverA，GoncalvesdaSilvaA，NuttallRK，etalAnelevatedmatrixmetalloproteinase

24、(MMP)inananimalmodelofmultiplesclerosisisprotectivebyaffectingTh1Th2polarization［J］FASEBJ，2005，19(12):1668－1670［2］吳江，賈建平，崔麗英神經病學［M］北京:人民衛(wèi)生出版社，2010:236－246［3］ZwibelHL，SmrtkaJImprovingqualityoflifeinmultiplesclerosis:anunm

25、etneed［J］AmJManagCare，2011，17(Suppl5):139－145［4］LublinFD，ReingoldSCDefiningtheclinicalcourseofmultiplesclerosis:resultsofaninternationalsurvey［J］Neurology，1996，46(4):907－911［5］DisantoG，BerlangaAJ，HelAE，etalHeterogeneityi

26、nmultiplesclerosis:scratchingthesurfaceofacomplexdisease［J］AutoimmuneDis，2010，2011(10):1－12［6］JonesJL，ColesAJNewtreatmentstrategiesinmultiplesclerosis［J］ExpNeurol，2010，225(1):34－39［7］鄭紹時中國北方多發(fā)性硬化臨床分型及預后研究［D］長春:吉林大學中日聯誼醫(yī)院