非甾體類抗炎藥活化基因-1在胃癌中的表達(dá)及其真核表達(dá)載體的構(gòu)建.pdf

1、目的：
　　 1.研究非甾體類抗炎藥活化基因-1(nonsteroidalanti-inflammatorydrug-activatedgene-1，NAG-1)在胃癌組織中的表達(dá)及與胃癌臨床病理特征之間的關(guān)系，探討NAG-1在胃癌發(fā)生、發(fā)展和侵襲中的作用。
　　 2.構(gòu)建NAG-1的真核表達(dá)載體pEGFP-N1/NAG-1，為體外研究NAG-1基因功能建立實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。
　　 方法：
　　 1.采用半定量逆

2、轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)法檢測(cè)76例原發(fā)性胃癌患者癌組織及相應(yīng)胃正常黏膜組織中NAG-1mRNA的表達(dá)；
　　 2.采用免疫組織化學(xué)S-P方法檢測(cè)胃癌及正常胃粘膜組織中NAG-1蛋白的表達(dá)情況；
　　 3.以正常胃粘膜組織cDNA為模板，用RT-PCR技術(shù)擴(kuò)增NAG-1基因片段，將該片段插入表達(dá)載體pEGFP-N1中，并通過藍(lán)白斑實(shí)驗(yàn)、酶切、PCR和DNA測(cè)序刷選和鑒定陽性克隆。
　　 結(jié)果：
　　

3、 1.正常組織和胃癌組織中均表達(dá)NAG-1mRNA，胃癌組織中的相對(duì)含量為0.5563±0.2181，顯著低于胃正常組織的0.9059±0.0751(P＜0.05)。高、中分化胃癌組織中的NAG-1mRNA相對(duì)含量為0.6701±0.1637，顯著高于低、未分化胃癌組織的0.4005±0.1859(p＜0.05)。不同浸潤(rùn)深度、有無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、不同臨床分期的胃癌組織間NAG-1mRNA相對(duì)含量的差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p＞0.05)。

4、r>　　 2.胃癌組織的NAG-1蛋白的表達(dá)程度顯著于低于胃正常粘膜組織(X2=47.186，p=0.000＜0.05)。細(xì)胞分化程度低的癌組織NAG-1蛋白表達(dá)程度顯著低于分化程度高的癌組織(X2=7.506，p=0.006＜0.05)。不同性別、有無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、不同臨床分期的胃癌組織間NAG-1蛋白表達(dá)程度的差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p值＞0.05)。
　　 3.對(duì)陽性克隆進(jìn)行PCR、酶切及DNA測(cè)序鑒定，證實(shí)NAG-1目的片段

5、已正確插入表達(dá)載體。
　　 結(jié)論：
　　 1.NAG-1mRNA在胃癌組織中的表達(dá)與浸潤(rùn)深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、TNM分期無關(guān)，而與腫瘤的分化程度相關(guān)，提示NAG-1mRNA的表達(dá)程度影響胃癌的分化。
　　 2.NAG-1蛋白的表達(dá)與腫瘤分化程度相關(guān)，NAG-1蛋白質(zhì)在胃癌組織中的表達(dá)與浸潤(rùn)深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、TNM分期無關(guān)，提示NAG-1蛋白質(zhì)的表達(dá)可能影響胃癌的分化。
　　 3.NAG-1mRNA在胃癌組織低