家蠶濃核病毒鎮(zhèn)江株部分核苷酸序列分析及主要結(jié)構(gòu)蛋白基因vp的表達(dá)

1、中國農(nóng)業(yè)科學(xué)研究院碩士學(xué)位論文家蠶濃核病毒（鎮(zhèn)江株）部分核苷酸序列分析及主要結(jié)構(gòu)蛋白基因（vp）的表達(dá)姓名：許光治申請學(xué)位級別：碩士專業(yè)：特種經(jīng)濟(jì)動物飼養(yǎng)指導(dǎo)教師：郭錫杰20040601A n a l y s i s o f P a r t i a lD N A S e q u e n c e s o f B o m b y x m o r iD e n s o v i r u s ( Z h e n j i a n g s t a i

2、 n ) a n d E x p r e s s i o no f I t sM a j o rS t r u c t u r a l P r o t e i n ( v p ) G e n e i nE s c h e r i c h i a c o l iA b s t r a c tA n a t t e m p t t o i d e n t i f y t h er e l a t i o n s h i pb e t w e

3、 e n B o m b y x m a r l D e n s o v i r u s ( B m D N V ) Z h e n j i a n gs t r a i n a n dB m D N V Y a m a n a s h is t r a i n ，p a r t i a l D N A s e q u e n c e so fB m D N V ( Z h e n j i a n gs t r a i n ) w e

4、r ed e t e r m i n e da n dc o m p a r e dw i t ht h ec o r r e s p o n d i n gr e g i o no fB m D N V ( Y a m a n a s h is t r a i n ) ．T h em a j o rv i r a l s t r u c t u r a lp r o t e i n ( v p ) g o n ew a se x p

5、r e s s e db yE s c h e r i e h i ac o l i ( E c o l de x p r e s s i o ns y s t e ma n de x a m i n e db y W e s t e r n —b l o t t i n ga s s a y ．1 ．B a s e d o n n u c l e o t i d e s e q u e n c e so fB m D N V ( Y

6、a m a n a s h is t r a i n ) V D ] s e g m e n t ，o l i g o n u c l o t i d ep r i m e r sw a s d e s i g n e d ．E m p l o y i n gt h ed e s i g n e d ·p r i m e r s ，af r a g m e n to f n u c l e o t i d es e q u e

7、 n c e sa b o u t1 - 5K b ，w h i c hi ss p e c u l a t e dt ob et h em a j o rs t r u c t u r a lp r o t e i n ( v p ) g e n e ，w a sa m p l i f i e df r o mt h eg e n o m i cD N A o f B m D N V ( Z h e n j i a n g s t r

8、 a i n ) b y p o l y m e r a s e c h a i nr e a c t i o n ( P C R ) ．S e q u e n c e da n d a n a l y z e d w i t h D n a - s t a r s o f t w a r e ，t h e n u c l e o t i d e s e q u e n c e o ft h e c l o n e ds t r u c

9、 t u r a l p r o t e i n ( v p ) g o n ea n di t s d e d u c e d a m i n oa c i d s e q u e n c ea r e h i g h l yh o m o l o g o u sw i t h i t sh o m o i o g u e i nB m D N V Y a m a n a s h i s t r a i n ．w i t ht h e

10、 i d e n t i t yo f 9 8 ．1 ％a n d9 8 ．6 ％r e s p e c t i v e l y ．C o m p a r e dw i t hY a m a n a s h is t r a i n ，2 9b a s e sa n d7a m i n o a c i d so f t h ev pg o n ew e r es u b s t i t u t e di nZ h e n j i a n

11、 g s t r a i n ，r e s p e c t i v e l y ．N or e a d i n gf r a m es h i f tm u t a n tw a so b s e r v e d ．T h en e w l yd e t e r m i n e ds e q u e n c eh a sb e e ns u b m i t t e d t oO e n e B a n k a n d t h e a c

12、 c e s s i o n n u m b e r i sA Y 2 3 6 9 7 8 ．2 ．B a s e dO B n u c l e o t i d e s e q u e n c e so fB m D N V ( Y a m a n a s h is t r a i n ) V D 2 s e g m e n t ，u l i g o n u c l o t i d ep r i m e r st o w a r db

13、e t w e e n t w oo p e n r e a d i n gf l a m e s ( O R F s ) o nD N A o f t h ev i r u sw a sd e s i g n e d ．A n o t h e rf r a g m e n to fn u c l e o t i d es e q u e n c e sa b o u t1 ．O K bw a sg e n e r a t e df r

14、 o mB m D N V ( Z h e n j i a n gs t r a i n ) b yp o l y m e r a s ec h a i nr e a c t i o n ( P C R ) ．S e q u e n c e da n da n a l y z e dw i t hD n a —s t a rs o f t w a r e ，t h es i m i l a r i t yb e t w e e nt h

15、 ec o r r e s p o n d i n gr e g i o no fZ h e n j i a n gs t r a i n a n dY a m a n a s h is t r a i n w a s 9 8 ．5 ％．1 5 n u c l e o t i d em u t a n t s ，i n c l u d i n g3g a p s ，w e r ef o u n d i nt h es e g m e n

16、 t ．3 ．O n —l i n es e a r c h i n g w i t hB l a s ts o f t w a r ei nN C B I d a t ab a s e ，n oh o m o l o g o u ss e q u e n c e sw e r ef o u n de x c e p tD N A s e q u e n c eo f D e n s o v i r u s Y a m a n a s

17、h i s t r a i n ．4 ．T h em a j o r s t r u c t u r a lp r o t e i n ( 泐g a n e o f B m D N V ( Z h e n j i a n g s t r a i n ) w a si n s e r t e di n t ob e t w e e nt h eE c o R la n dB a m H ls i t e s o ft h em u l t

18、 i p l ec l o n i n gs i t e s ( M C S ) o f t h ee x p r e s s i o np l a s m i dp E T - 2 8 au n d e r t h ei n d u c i b l ep r o m o t e rL a c Z ，T r a n s f o r m e d a n de x p r e s s e di nE ．c o l iB L 2 1 ( D

19、E 3 ) ，a 5 3 K D p r o t e i n ，i d e n t i c a lt ot h ep r e d i c t e dm o l e c u l a rm a s s ，w a sd e m o n s t r a t e db yS D S - P A G E a n a l y s i s ．T h ep r o d u c tc a nr e a c tw i t hp o l y c l o n a