藥用蛋白分子原核表達(dá)與分離純化stnfrⅱ、rhgcsf、m.rcag1

1、山西大學(xué)2 0 13 屆碩士學(xué)位論文藥用蛋白分子原核表達(dá)與分離純化：s T N F R I I 、r h G —C S F , M ．R C A g 一1作者姓名 李佳睿指導(dǎo)教師 王蘭教授蘇志國(guó)研究員學(xué)科專業(yè) 水生生物學(xué)研究方向 藥用大分子蛋白表達(dá)純化培養(yǎng)單位 山西大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院中國(guó)科學(xué)院過程工程研究所學(xué)習(xí)年限 2 0 1 0 年9 月至2 0 1 3 年6 月二。一三年六月目 錄中文摘要???????????????????????

2、?????????????．．I英文摘要???????????????????????????????????．I I第一章生物制藥的簡(jiǎn)單綜述????????????????????????????11 生物類藥物的開發(fā)歷史與國(guó)內(nèi)外趨勢(shì)???????????????????11 ．1 生物類藥的產(chǎn)業(yè)化趨勢(shì)??????????????????????．11 ．2 四大生物類藥的研究趨勢(shì)?????????????????????12 我國(guó)生

3、物制藥產(chǎn)業(yè)面臨的挑戰(zhàn)??????????????????????2第二章I I 型可溶重組人腫瘤壞死因子受體s T N F R I I 的原核表達(dá)與分離純化??．31 前言???????????????????????????????????????????。31 ．1 人腫瘤壞死因子a ( h T N F ．∞與I I 型可溶重組人腫瘤壞死因子受體s T N F R I I的生物學(xué)功能?????????????????????????

4、???31 ．2 蛋白表達(dá)系統(tǒng)與s T N F R I I 仿制藥設(shè)計(jì)思路??????????????41 ．2 ．1 蛋白表達(dá)系統(tǒng)的概述?????????????????????41 ．2 ．2 目的蛋白開發(fā)難點(diǎn)??????????????????????51 ．2 ．3 目的蛋白設(shè)計(jì)思路??????????????????????51 ．3 本章實(shí)驗(yàn)?zāi)康??????????????????????????．62 材料與方法?????

5、??????????????????????????????62 ．1 材料????????????????????????????????????????．62 ．2 方法????????????????????????????????????????．72 ．2 ．1 工程菌的誘導(dǎo)表達(dá)及破碎離心?????????????????72 ．2 ．2 目的蛋白的初步純化?????????????????????72 ．2 ．3 目的蛋白層

6、析純化的條件優(yōu)化?????????????????72 ．2 ．4 對(duì)不同上樣條件下所得目的蛋白純度考核????????????83 結(jié)果與討論??????????????????????????????????．1 03 ．1 工程菌的誘導(dǎo)表達(dá)及破碎?????????????????????1 03 ．2 目的蛋白的純化效果???????????????????????1 l3 ．2 ．1S D S ．P A G E 凝膠電泳檢測(cè)純化

7、效果??????????????．1 13 ．2 ．2 洗脫峰蛋白質(zhì)濃度的測(cè)定??????????????????1 23 ．2 ．3 洗脫峰濃縮跑膠驗(yàn)證????????????????????1 33 ．2 ．4 洗脫峰純度高效液相色譜( H P L C ) 驗(yàn)證?????????????．1 43 ．3 討論???????????????????????????????????????．．1 5第三章重組人粒細(xì)胞集落刺激因子( r

8、h G ．C S F ) 的生產(chǎn)中試???????????1 71 前言???????????????????????????????????????????1 71 ．1 人集落刺激因子與其重組蛋白藥物介紹???????????????1 71 ．1 ．1 h G C S F 和r h G ．C S F 的基因與結(jié)構(gòu)???????????????1 71 ．1 ．2 G C S F 和r h G ．C S F 生物學(xué)作用???????