酵母營(yíng)養(yǎng)缺陷型菌株構(gòu)建及轉(zhuǎn)化條件優(yōu)化.pdf

1、醬油高鹽稀態(tài)發(fā)酵過(guò)程中添加魯氏酵母（簡(jiǎn)稱S酵母）和假絲酵母（簡(jiǎn)稱T酵母）來(lái)增強(qiáng)醬油的風(fēng)味品質(zhì)。但是目前對(duì)S酵母和T酵母進(jìn)行遺傳操作沒有相應(yīng)的營(yíng)養(yǎng)缺陷型菌株。因此，本論文分別對(duì)S酵母和T酵母進(jìn)行EMS誘變和紫外誘變，以期獲得尿嘧啶營(yíng)養(yǎng)缺陷型菌株。繼而，對(duì)其電轉(zhuǎn)化方法進(jìn)行優(yōu)化，為后續(xù)耐鹽酵母的分子生物學(xué)研究奠定基礎(chǔ)。
　　首先，對(duì)S酵母的甲基磺酸乙酯(EMS)和紫外最佳誘變條件進(jìn)行了測(cè)定:S酵母最適EMS誘變條件為:EMS濃度1％-2

2、％，誘變時(shí)間為60min，最適宜誘變的菌濃度為OD660=0.9。S酵母最適紫外誘變條件為:照射距離25cm，照射時(shí)間為65秒，最適宜誘變的菌濃度為OD660=0.9。通過(guò)研究，S酵母在EMS濃度為1％時(shí)，經(jīng)過(guò)60min的誘變誘變條件，得到1株具有遺傳穩(wěn)定性的尿嘧啶營(yíng)養(yǎng)缺陷型菌株S3。
　　同時(shí)，對(duì)T酵母的EMS和紫外最佳誘變條件進(jìn)行了測(cè)定:T酵母最適EMS誘變條件為:EMS為濃度1％，誘變時(shí)間為55min，最適宜誘變的菌濃度為O

3、D660=0.9。T酵母最適紫外誘變條件為:照射距離25cm，照射時(shí)間為55秒，最適宜誘變的菌濃度為OD660=0.9。通過(guò)研究，T酵母在EMS濃度為1％時(shí)經(jīng)過(guò)55min的誘變條件，得到1株具有遺傳穩(wěn)定性的尿嘧啶營(yíng)養(yǎng)缺陷型菌株T1。
　　然后，對(duì)S3酵母和T1酵母的最佳電轉(zhuǎn)化條件進(jìn)行優(yōu)化。S3的最適電轉(zhuǎn)化條件為:DNA質(zhì)量為0.3μg，Li+濃度40mM，電壓為1800V;T1的最適電轉(zhuǎn)化條件為:DNA質(zhì)量為0.1μg，Li+濃度